Standardni testi za potrjevanje IgE senzibilizacije imajo nizko specifičnost, saj je delež asimptomatske senzibilizacije visok. Zato smo želeli postaviti nov diagnostični celični test, ki temelji na in vitro kultivaciji in aktivaciji mastocitev (MAT: test aktivacije mastocitev). Primarne celice mastocitev smo kultivirali iz prekurzorskih krvnih celic, IgE senzibilizirali s serumi bolnikov in stimulirali z določenimi alergeni ali rekombinanti. Degranulacijo smo spremljali s pretočno citometrijo. Ugotovili smo da ima MAT test superiorno klinično uporabnost glede na do sedaj poznane teste, še posebej za napoved težke alergijske reakcije. Postavitev tega novega celična testa bo omogočalo nadaljnje raziskave o različni vlogi bazofilcev in mastocitev med alergijsko reakcijo. Zelo pomembno, ključni novi metodološki pristopi uporabljeni v tej študiji so bili v precejšnjem delu v okviru našega projekta. Ugotavljanje bolnikove kompletne specifične IgE alergogene aktivnosti z uporabo kombinacije rekombinantnih alergenov in multiparameterske analize aktivacije bazofilcev.
COBISS.SI-ID: 2048257905
Za IgE posredovane alergijske reakcije je ključna aktivacija efektorskih celic bazofilcev in mastocitov. Na te efektorske celice so namreč preko visoko afinitetnega IgE receptorja vezane specifična IgE protitelesa in ko te celice pridejo v stik z alergenom, alergen prekriža ta IgE protitelesa, kar rezultira v degranulaciji in sproščanju mediatorjev alergijskega vnetja. Čeprav trenutno velja prepričanje, da imajo poglavitno vlogo mastociti, pa zadnje raziskave kažejo na izjemno pomembno in specifično vlogo bazofilcev, kar je bilo v centru raziskav tega projekta. Namreč, ugotovili smo, da med sistemsko alergijsko reakcijo izredno hitro migrirajo iz periferne krvi na mesto vnetja. Ta migracija ima lahko patogeno vlogo (bazofilci se aktivirajo in degranulirajo v tkivu), manj verjetna, a možna, pa je tudi zaščitna vloga (z migracijo se prepreči aktivacija bazofilcev v krvi). Poleg pri težki sistemski alergijski reakciji - anafilaksiji - je ta migracija verjetno zelo pomembna tudi pri poslabšanju astme.
COBISS.SI-ID: 2048254577
Natančna vloga bazofilcev pri sistemskih alergijskih reakcijah trenutno ni poznana. Zato smo med akutno fazo preučili njihovo vlogo pri bolnikih, ki smo jih analizirali ob vstopu v urgentno ambulanto po piku kožekrilcev in sistemski reakciji na terenu ter pri bolnikih, ki so bili v kliničnem okolju provocirani z alergenom arašidov in je ta provokacija pripeljala do sistemske alergijske reakcije. Pri teh bolnikih smo merili IgE alergogeno aktivnost z uporabo kombinacije rekombinantnih alergenov, absolutno število bazofilcev v krvi, gensko ekspresijo FCER1A, CPA3 in HDC ter serumske markerje CCL2, CCL5, CCL11, IL3 in TSLP. Rezultate, pridobljene med akutno fazo reakcije, smo primerjali z vzorci, odvzetimi sedem dni in en mesec po reakciji. Ugotovili smo, da med reakcijo pride do močnega znižanja števila bazofilcev v krvi, kar sovpada tudi s spremembo genske ekspresije na nivoju FCER1A, CPA3 in HDC. Nismo pa ugotovili sprememb na nivoju IgE alergogene aktivnosti. Vzporedno s temi spremembami smo ugotovili tudi povišanje CCL2, ki je ključni kemotaktični faktor za bazofilce. Ti rezultati kažejo, da med sistemsko reakcijo pride do izrazite migracije bazofilcev v tarčna tkiva ter kaže na njihovo specifično in pomembno vlogo pri patofiziologiji anafilaksije.
COBISS.SI-ID: 33355481
V tej študiji smo na več različnih modelih preučili pasivno IgE senzibilizacijo bazofilcev, kar je bil ključni metodološki in vsebinski pristop tega projekta. Vključili smo bolnike preobčutljive za oso, trave ali pršice in ugotavljali, kako različna IgE prototelesa vplivajo na odzivnost bazofilcev. Aktivacijski marker, ki smo ga analizirali, je bil CD63. Ugotovili smo, da imajo pri različnih modelih IgE protitelesa različno vlogo. Na modelu ose se pokazala, da je ključna notranja celična odzivnost bazofilcev, medtem ko se je na modelu trave in pršice izkazalo, da je ključna alergogena aktivnost IgE protiteles.
COBISS.SI-ID: 32998873
Test aktivacije bazofilcev postaja ena ključnih metodologij pri diagnostiki in prognostiki kompleksnejših primerih v alergologiji. Še posebej pomembno pri tem razvoju je ovrednotenje različnih aktivacijskih markerjev in razvoj novih metodologij za analizo tega testiranja. Ključno pri razvoju tega testa pa je tudi širša uporaba rekombinantnih alergenov. Trenutno se razvija naslednje aplikacije, povezane s tem testom: spremljanje bolnikov na specifični imunoterapiji, spremljanje bolnikov med uvajanjem in po zaključku anti IgE terapije ter spremljanje naravnega poteka bolezni. Predvsem pa je velika želja, da bi se ta test uporabljal tudi za napoved teže reakcije. Trenutno namreč ni nobene metodologije, ki bi to omogočila.
COBISS.SI-ID: 37979653