Akaraicidi in fungicidi, kot sta kumafos in prokloraz, nista toksična za čebele, vendar pa v kombinaciji lahko povzročita povečano občutljivost čebel ali smrt. V študiji smo proučili molekularni imunski odziv čebel delavk v razvojni fazi pre-bube, belooke bube in odrasle čebele po izpostavitvi akaricidu kumafos in fungicidu prokloraz. Živali smo tretirali z vsakim pesticidom posamično in v kombinaciji. S kvantitativno RT-PCR reakcijo smo analizirali izražanje 17-ih genov, povezanih z imunostjo čebel. V primerjavi z netretiranimi čebelami je bila večina genov manj izražena ob vseh vrstah tretmajev pri pre-bubah in bolj izražena pri vseh vrstah tretmajev pri odraslih čebelah. Prvi smo pokazali, da se negativni učinki prokloraza in kombinacije prokloraza in kumafosa razlikujejo med različnimi razvojnimi stopnjami. Glavni učinek teh dveh pesticidov v kombinaciji je povečano izražanje antimikrobnih peptidnih genov abaecin in defenzin-1 pri odraslih čebelah. Spremembe v izražanju z imunostjo povezanih genov lahko povzročijo zmanjšano imunsko sposobnost čebel in povečano dovzetnost za okužbo s patogeni.
COBISS.SI-ID: 3642248
V študiji smo preučevali vpliv neonikotinoida tiametoksama na medonosne čebele (Apis mellifera carnica), ki so bile predhodno okužene s pršico Varroa destructor. Pred začetkom eksperimenta smo satje z nepokrito zalego iz začetnih panjev prenesli v eksperimentalne panje in s tem zmanjšali vpliv genetske variabilnosti med panji. Od osmih eksperimentalnih panjev so štirje bili okuženi z varojo, preostali štirje pa so bili neokuženi. Ob začetku poskusa smo začeli s hranjenjem družin (100g proteinske pogače/dan). Dve okuženi in neokuženi družini sta imeli v proteinsko pogačo dodan tudi tiametoksam (10g/kg). Vzorčenje čebel je potekalo deseti dan po začetku hranjenja družin s tiametoksamom. Celokupno RNA smo izolirali iz 12 čebel na skupino in prepisali v komplementarno DNA (cDNA). Z uporabo PCR reakcije v realnem času smo analizirali izražanje genov v realnem času (povezanimi z imunskim odzivom (17), razstrupljanjem (8), apoptozo (5) in razvojem (2)).
COBISS.SI-ID: 3838856
Naš cilj je bil vzpostaviti čebelje trajne celične linije za standardizirano in vitro testiranje vpliva ksenobiotikov in patogenov. Tako bi omogočili preučevanje in razumevanje mehanizmov, ki so prisotni in vivo. Prvi korak je bila priprava primarnih celičnih linij. Opisali smo metode učinkovitega ohranjanja različnih čebeljih celic v in vitro pogojih. Standardizirali smo pripravo celic iz različnih razvojnih stopenj in delov čebel (jajčeca, ličinke, bube, možgani in hipofaringealne žleze odraslih čebel, ter jajčniki matic). Optimizirali smo medije in rastne pogoje za različne tipe celic. Le celice iz jajčec in bub so bile uporabljene za nadaljnja testiranja. Medij L-15 z dodatkom je podpiral dolgoročno rast celic jajčec, medtem ko je bil medij WH2 uporabljen za dolgoročno gojenje celic bub. Celice smo uspešno gojili do šest mesecev, izvor celic pa smo potrdili z uporabo PCR specifičnih oligonukleotidnih začetnikov. Določili smo celične fenotipe (majhne prosto plavajoče celice, celice podobne nevronom in več jedrne celice). Celice pridobljene iz bub smo uspešno krio-konzervirali. Po odmrzovanju smo preverili njihovo preživetje ()85%) z uporabo tripan modro in propidijevim jodidom, pri čemer je bil propidijev jodid najbolj primeren.
COBISS.SI-ID: 3838600
Kranjska čebela, Apis mellifera carnica, je Slovenska avtohtona pasma medonosne čebele. V zadnjih letih so v Sloveniji, podobno kot v Evropi, zabeležili 15-35% letno izgubo čebeljih družin. Eden od možnih razlogov za množičen pogin čebel je lahko izpostavljenost čebel insekticidom, akaricidom, herbicidom in fungicidom. Omenjene kemikalije so dokazali v čebelah in tudi v čebeljih izdelkih. Akaricidi se uporabljajo za nadzor ektoparazitske pršice Varroa destructor, ki je eden od najbolj zaskrbljujočih patogenih organizmov čebel v Evropi. Od fitofarmacevtskih sredstev se najpogosteje uporabljajo funhgicidi, sredstva za zatiranje plesnivosti kmetijskih pridelkov. Ostanke fungicidov so dokazali v čebelah in čebeljih izdelkih čebel, ki so se pasle v bližini cvetočih kmetijskih rastline. Akaricidi in fungicidi ne delujejo zelo strupeno na čebele sami po sebi, vendar pa lahko, če delujejo v kombinaciji, povzročijo večjo smrtnost čebel. V naši študiji smo preverili molekularni odziv različnih razvojnih faz čebel delavk (ličinke, bube, odrasle čebele), ki smo jih izpostavili kombinaciji akaricida kumafos in fungicida prokloraz. S kvantitativno RT-PCR smo preverili ekspresijo več imunskim odgovorom povezanih genov, genov povezanih z detoksikacijsko sposobnostjo in razvojem čebel. Opazili smo, da kombinacija kumafosa in prokloraza povzroči povečan učinek na več preučevanih genih. Ugotovili smo tudi, da imajo posamična pripravka ali v kombinaciji, pomemben vpliv na izražanje genov in različen v različnih razvojnih fazah čebele delavke.
COBISS.SI-ID: 3453576