Rezultati naših raziskav so bili izbrani za ustno predstavitev na najpomembnejšem srečanju evropskih raziskovalcev kalcificiranih tkiv, ki ga vsako leto organizira European Calcified Tissue Society. V študiji smo s tehnologijo Nanostring nCounter izmerili ekspresijski profil 800 mikro RNA v kostnih vzorcih bolnic z osteoporoznim zlomom kolka (OP) ali primarno osteoartrozo (OA). S qPCR smo validirali diferencialno izražene mikro RNA in njihove predvidene tarče. Razlike v izražanju med skupinama smo opazili pri 9 mikro RNA. Za validacijo v skupini 103 preiskovank smo izbrali miR-195-5p and miR-204-5p. Prav tako smo z uporabo treh bioinformatičnih orodij napovedali njune potencialne tarčne gene, ki bi lahko igrali pomembno vlogo v kostni presnovi. Pokazali smo značilno razliko v izražanju in miR-195-5p, ne pa miR-204-5p med preiskovanimi skupinami (P(0.0001). Dodatno smo pokazali negativno korelacijo miR-195-5p in njenih potencialnih tarčnih genov ELOVL6 (P=0.001), GSTCD (P(0.0001) in MYB (P=0.035). Njihovo izražanje je bilo značilno različno in sicer najnižje pri bolnicah z OP, sledila je skupina bolnic z OA in zdravih kontrol (P(0.0001 za vse tri gene). V naši študiji smo prvi identificirali miR-195-5p kot potencialni biološki označevalec pri OP in OA. Za to mikro RNA so nedavno dokazali pomen v kostni presnovi, in sicer inhibira diferenciacijo osteoklastov. Naš dokaz negativne korelacije nivoja miR-195-5p z izražanjem genov ELOVL6, GSTCD in MYB predstavlja dokaz za možno interakcijo. V teku so nadaljnje funkcijske študije za potrditev direktne interakcije s predvidenimi tarčnimi geni.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4089969Projektna skupina skrbi za diseminacijo novih znanstvenih odkritij in strokovnih vsebin na področju kostnih bolezni ter njihovo implementacijo v klinično prakso. Trije člani projektne skupine so sodelovali v organizacijskem odboru 5-ih Osteoloških dnevov, dvodnevnem interdisciplinarnem srečanju z mednarodno udeležbo, namenjenem vsem profilom, ki se pri svojem delu srečujejo z boleznimi kostnine in njihovimi posledicami. Prav tako pa so trije člani na srečanju imeli vabljena predavanja, od tega eno iz tematike mikro RNA. V predavanju je bila orisana fiziološka in patofiziološka vloga mikro RNA, potencial v diagnostiki in terapiji ter trenutni izzivi. Predstavili smo tudi vsebino in rezultate našega projekta ter njegov pomen, saj so študije mikro RNA na področju kostnih bolezni šele v začetni fazi.
B.04 Vabljeno predavanje
COBISS.SI-ID: 4036209V letu 2015 je doktorski študij uspešno zaključil mladi raziskovalec Peter Vrtačnik. Pri svojem delu je uporabljal sodobne metode in rezultate, pridobljene na in vitro modelu, nadgradil z analizo kostnih vzorcev bolnikov, s čimer jim je dal večji klinični pomen. Kot prvi je v osteoblastih proučeval in dokazal vpliv oksidativnega stresa in hipoksije na izražanje več genov, povezanih z acetilacijo histonov, metilacijo DNA in mikro RNA. Dokazane razlike v izražanju teh genov v kostnih vzorcih bolnikov z osteoporozo in osteoartrozo kažejo na njihovo vpletenost v patogenezo obeh bolezni, hkrati pa jih uvrščajo med potencialne tarče, na katerih bi lahko temeljila prihodnja generacija zdravilnih učinkovin z anabolnim delovanjem na skelet. Tekom študija je objavil 4 članke v mednarodnih revijah z dejavnikom vpliva, eno delo pa je poslano v objavo. Po zaključenem doktorskem študiju nadaljuje s podoktorskim izobraževanjem na ugledni evropski medicinski univerzi (Karolinska Institutet). V okviru projekta so bile opravljene 4 magistrske naloge, 4 pa so še v teku, pri čemer je eksperimentalni del že zaključen.
D.09 Mentorstvo doktorandom
COBISS.SI-ID: 278090496Vpliv estrogenov na izražanje miRNA so dosedaj proučevali predvsem pri raku dojke, kjer so se pokazale kot novi diagnostični in prognostični biološki označevalci, ugotovili pa so tudi njihov pomen pri rezistenci na tamoksifen in inhibitorje aromataze. Učinek estrogenov na kostne miRNA so dosedaj proučevali le v eni študiji na živalskem modelu, ki kaže na pomen miRNA pri nastanku pomenopavzne osteoporoze. Cilj te razskave je bil ugotoviti vpliv 17β estradiola (E2) na izražanje miRNA v humanih osteoblastih. V osteoblastno celično linijo smo s plazmidnim vektorjem vnesli zapis za estrogenski receptor α in s prenosom po Westernu potrdili uspešnost transfekcije. 24 in 72 ur po izpostavtivi E2 smo izolirali celotno RNA in izmerili profil 800 miRNA s tehnologijo Nanostring nCounter. Izražanje estrogenskih receptorjev: ERα, ERβ in GPER1 smo izmerili s kvantitativnim PCR v realnem času. Po 24-urni izpostavitvi E2 smo dokazali znižano izražanje miR-4516 po 72 urah pa se je znižalo izražanje miR-520d-5p, miR-376a-3p, miR-518b, miR-593-3p and miR-338. Medtem, ko za ostale miRNA še ni podatkov o vpletenosti v biologijo osteoblastov, je bil za miR-338-3p že potrjen učinek na znižano diferenciacijo osteoblastov preko neposredne inhibicije transkripcijskega dejavnika RUNX2. Rezultati naše in vitro študije podpirajo pomen miRNA kot epigenetskega odziva na estrogene v osteoblastih, kar bi lahko bilo pomembno tudi in vivo npr. pri odzivu na hormonsko nadomestno zdravljenje.
B.04 Vabljeno predavanje
COBISS.SI-ID: 4014449Osteoporozni zlomi so izredno pogosti, znatno poslabšajo kakovost življenja bolnikov, ki zlome utrpijo, povečajo njihovo smrtnost in povzročajo ogromne stroške. Prof. Preželj je kot eden vodilnih strokovnjakov na področju klinične obravnave osteoporoze v državi, tudi avtor aktualnih slovenskih smernic za odkrivanje in zdravljenje osteoporoze. Smernice so v našem prostoru uspešno uveljavile računalniški model FRAX, ki omogoča prepoznavanje in zdravljenje posameznikov z visokim tveganjem za zlom, kar je edini način za učinkovito preprečevanje osteoporoznih zlomov, izboljšanje kakovosti življenja in preživetja starostnikov ter za zmanjšanje ekonomskih stroškov.
F.22 Izboljšanje obstoječih zdravstvenih/diagnostičnih metod/postopkov
COBISS.SI-ID: 4635711