Cilji študije so bili: 1. identificirati in kvantificirati metabolite progesterona v modelnih celičnih linijah raka endometrija HEC-1A in Ishikawa in 2. določiti vloge posameznih encimov, ki so vključeni v metabolizem progesterona. Metabolite progesterona, ki so nastali v modelnih celičnih linijah, smo identificirali in kvantificirali s pomočjo tekočinske kromatografije s tandemsko masno spektrometrijo. S pomočjo kvantitativnega PCR in pristopa utišanja izbranih genov s pristopom siRNA smo določili vlogo posameznih encimov metabolizma progesterona. V celičnih linijah Ishikawa and HEC1-A se je progesterone metaboliziral predvsem v 20α-hidroksi-pregn-4-ene-3-one, 20α-hidroksi-5α-pregnane-3-one, and 5α-pregnane-3α/β,20α-diol. Celični liniji sta se razlikovali predvsem v hitrosti metabolizma progesterona. V celičnih linijah Ishikawa in HEC-1A je bil gen AKR1C2 110-krat in 6800-krat bolj izražen kot gen AKR1C1, kar nakazuje, da redukcijo 5α-pregnanov in 4-pregnenov katalizira predvsem encim AKR1C2. Utišanje genov AKR1C1/AKR1C2 je upočasnilo metabolizem progesterona v obeh celičnih linijah, kar še nadalje potrjuje pomen encima AKR1C2. V obeh celičnih linijah je bil izražen tudi gen SRD5A1. Utišanje tega gena je najbolj drastično zmanjšalo metabolizem progesterona in tako potrdilo, da redukcijo na mestu 5 katalizira predvsem encim 5α-reduktaza tipa 1. Naši rezultati kažejo, da imata encima AKR1C2 in SRD5A1 ključno vlogo v metabolizmu progesterona obeh modelnih celičnih linij raka endometrija.
COBISS.SI-ID: 31704793
Opisali smo razvoj metode tekočinske kromatografije z masno spektrometrijo za ločevanje, detekcijo in kvantifikacijo progesterona in 16 metabolitov v femtomolarnih koncentracijah. Za analizo z LC-MS/MS metodo potrebujemo majhen volumen in minimalno pripravo vzorca. V članku smo predstavili uporabo te metode za proučevanje metabolizma progesterona v celični liniji HES.
COBISS.SI-ID: 31822297
Človeški encimi AKR1C1-AKR1C3 in AKR1D1 imajo ključno vlogo v metabolizmu vseh steroidnih hormonov, biosintezi neurosteroidov in žolčnih kislin, metabolizmu konjugiranih steroidov in sintetičnih terapevtskih steroidov. Ti encimi katalizirajo NADPH- odvisno redukcijo na mestih C3, C5, C17 in C20 steroidnega skeleta in stranske verige. Encimi AKR1C1-AKR1C4 delujejo kot 3-keto, 17-keto in 20-ketosteroid reduktaze, medtem ko AKR1D1 deluje kot steroid 5beta-reduktaza. AKR1 encimi tako uravnavajo koncentracijo aktivnih ligandov jedrskih receptorjev in s tem njihovo zasedenost in trans-aktivacijo. Uravnavajo pa tudi koncentracije nevrosteroidov, ki modulirajo aktivnost receptorjev GABAA in NMDA. Na ta način so ti encimi vključeni v pred-receptorsko uravnavanje delovanja jedrskih in membranskih receptorjev.Spremenjeno izražanje posameznih AKR1C genov povezujejo z razvojem raka prostate, dojk in endometrija. Mutacije v genih AKR1C1 in AKR1C4 so odgovorne za motnje v spolnem razvoju in mutacije v genu AKR1D1 za pomanjkanje žolčnih kislin.
COBISS.SI-ID: 30940121