Prispevek orisuje del izzivov s katerimi sem se soočil med opravljanjem doktorata na Katedri za biotehnologijo, mikrobiologijo in varnost živil in so predstavljali temelj za nadaljevanje raziskav v okviru podoktorskega projekta. Izzivi so bili osredotočeni na kvasovko Saccharomyces cerevisiae kot modelni organizem za študij na novo pojavljajočih se oportunističnih kvasnih patogenov. Iskanje virulentnih faktorjev je potekalo v fiziologiji invazivne rasti, v izražanju manoproteinov celične stene in v identifikacijski moči DNK mikrosatelitov. Zaradi slabo razvite metodologije na teh področjih je bilo raziskovanje usmerjeno v razvoj novih metodoloških rešitev na omenjenih področjih.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4147576To delo je bilo kot poster predstavljeno na 13. kongresu kvasovk (ICY) v ZDA. Predstavlja pregled raziskav, opravljenih na Katedri za biotehnologijo, mikrobiologijo in varnost živil in ki predstavljajo osnovo za dotični podoktorski projekt. V zadnjih dveh desetletjih se je povečala incidenca sistemskih, invazivnih okužb s kvasovko S. cerevisiae pri odraslih z oslabljenim imunskim sistemom in pri novorojenčkih. Glede na številne biotehnološke aplikacije, v kateri se kvasovko uspešno uporablja že več stoletij, je mogoče sklepati, da je patogenost lastnost le nekaterih sevov. Te sevi imajo najverjetneje posebne virulenčne faktorje kot so adhezivnost, invazivnosti in sposobnost rasti pri povišani temperaturi. Glavni cilj raziskav je bil določiti metodologijo za ocenjevanje virulence kliničnih sevov S. cerevisiae in poiskati povezavo med virulenčni mi faktoji in patogenostjo kvasovke. Zaradi slabo razvite metodologije na tem področju, smo najprej razvili kvantitativni test invazivne rati v agar in postopek za kvantitativno profiliranje proteinov celične stene. Invazivnost kliničnih sevov je bila izmerjena v različnih pogojih rasti (pri različni temperaturi, pH vrednosti, pomankanju hranil, v spremenjeni atmosferi, in pri različnih koncentracijah NaCl, CaCl2 in konzervansov), ki so relevantni za človeka in/ali živila. Občutno povečanje invazivnosti virulentnih sevov je bila izmerjeno pri temperaturah, ki so značilni za povišano telesno temperatura (37-39 ° C), kar razkriva potencial za okužbo pri ljudeh. Močna preferenca za invazivno rast (kar tehnično pomeni visoko relativno invazijo) smo opazili tudi v gojiščih z manj dušika in glukoze. Po drugi strani pa se je pokazal močan represivni učinek pri povišani koncentraciji soli, pomanjkanju kisika in pri dodatkih nekaterih konzervansov. Pregled proteinov celične stene je pokazal na prisotnost do 20 proteinov z molekularno maso v območju 60-220 kDa, za katere smo opazili pomembne spremembe v izražanju pri različni temperaturi, morfologiji celic (invazivna v primerjavi z neinvazivno kolonijo) in pri različnih sevih. Rezultati raziskav so pokazali razmeroma veliko raznolikost domnevnih virulenčnih faktorjev pri kliničnih sevih kvasovke S. cerevisiae, kar je odprlo dodatna vprašanja o virulenčnem potencialu sevov, ki se uporabljajo v živilih in v prehranskih dodatkih.
B.06 Drugo
COBISS.SI-ID: 4124536Prispevek v obliki postra je bil predstavljen na 13. kongresu kvasovk (ICY) v ZDA. Tematika prispevka se navezuje na quorum sensing (QS), oz. medcelično komunikacijo, ki je bila opažena pri kvasovkah in je preko specifičnih mehanizmov, ki se sprožijo, ko celice zaznavajo pomanjkanje hranil, povezana tudi z virulenco. Na Katedri za biotehnologijo, mikrobiologijo in varnost živil smo razvili hitro in enostavno metodo za merjenje QS molekul, ki omogoča proučevanje omenjenega fenomena.
B.06 Drugo
COBISS.SI-ID: 4124280