Imatinib je močan selektivni zaviralec tirozinskih kinaz, ki se uporablja za zdravljenje kronične mieloične leukemije in gastrointestinalnega stromalnega tumorja. Čeprav je dobro znano, da se učinkovina kot substrat veže na različne prenašalne proteine, ki so aktivni tudi v črevesju, mehanizem absorpcije in eliminacije imatiniba v črevesju še ni dobro proučen. S tem namenom smo segmente podganjega črevesa vpeli v Sweetana Grass difuzijske celice, izmerili permeabilnostne koeficiente imatiniba in njegovega glavnega metabolita N-desmetil imatiniba v obeh smereh z oziroma brez specifične in splošne inhibicije aktivnega transporta ter izračunali efluksno razmerje. Naši rezultati kažejo, da je visoka biološka uporabnost imatiniba zelo verjetno dosežena z aktivno absorpcijo učinkovine iz črevesa, njena aktivna eliminacija pa je posredovana s sinergističnim delovanjem organskega kationskega prenašalca 1 na bazolateralni strani membrane in dodatno aktivnostjo dveh efluksnih prenašalcev (P-glikoproteina in BCRP) na apikalni membrani enterocita podgane. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je v prenos N-desmetil imatiniba preko membrane vpleten le P-glikoprotein.
COBISS.SI-ID: 3566705
Uspeh zdravljenja kronične mieloične leukemije naj bi bil po literaturnih podatkih močno pogojen z aktivnim transportom učinkovine v tarčno celico. Metode za analitsko ovrednotenje znotrajceličnih koncentracij so redke in običajno vezane na uporabo radioaktivno označenih spojin. Tako tudi metoda za določanje koncentracije imatiniba v granulocitih v literaturi še ni bila objavljena. Da bi lahko podrobneje pročili privzem imatiniba v omenjene celice, smo v pripravo vzorca za merjenje celičnih koncentracij učinkovine vpeljali dvostopensko koncentriranje celičnega ekstrakta, pridobljen koncentrat pa analizirali z LC-MS/MS metodo. Zanesljivost in občutljivost pridobljenih meritev je bila potrjena z uspešno validacijo vseh potrebnih parametrov metode do limite kvantifikacije 0,5 ng imatiniba/ 106 celic pri razmerju signal/šum 670. Le 6 mL krvi potrebne za obravnavo posameznega bolnika dodatno dopolnjuje uporabnost vpeljane metode. Metoda je bila za klinično uporabo preiskušena na vzorcu 13 bolnikov s KML zdravljenih z imatinibom, katerih določene znotrajcelične koncentracije so bile vse znotraj validiranega območja koncentracij. Določanje znotrajcelične koncentracije imatiniba v granulocitih in nekatere dodatne meritve nam bodo služile za nadaljne raziskave vpliva dejavnikov, ki poleg plazemske koncentracije določajo posameznikov odgovor na zdravljenje z imatinibom. Poleg tega bi opisana metoda lahko služila tudi za individualizacijo odmerjanja zdravila na osnovi dejanskega privzema imatiniba v celice.
COBISS.SI-ID: 3441521
Imatinib, dasatinib in nilotinib so trije tirozinkinazni inhibitorji v uporabi pri nas za zdravljenje BCR-ABL1 pozitivne kronične mieloične leukemije. Doseganje maksimalnega uspeha zdravljenje levkemije z naštetimi učinkovinami močno pogojujeta tako ustrezno odmerjanje kot tudi jemanje zdravila. Terapevtsko spremljanje koncentracije učinkovin v krvi oz. plazmi zato predstavlja pomembno orodje pri vodenju bolnikov s to boleznijo. Članek opisuje razvoj preproste in hitre metode za sočasno določanje vseh treh tirozinkinaznih inhibitorjev iz madeža krvi (DBS- ang. dried blood spot) bolnikov s KML. DBS vzorce smo pripravili z nanosom 10 μL polne krvi na Agilent DBS kartico. Po sušenju smo celoten madež krvi izrezali in prenesli v luknjico na 96 Captiva ND Lipids fiterski plošči. Po dodatku izotopsko značenega internega standarda smo spojino ekstrahirali z 0,1% formično kislino v metanolu. Zbran ekstrakt (1 μL) smo injicirali na kolono Phenomenex Kinetex 50×2.1mm C18 in ga eluirali z gradientom acetonitrila v trojni kvadropol ESI-MS/MS Agilent 6460 delujč v pozitivnem načinu. Celoten čas analize enega vzorca na LC-MS/MS aparatu je bil 2,6 min. Metoda je bila validirana z ozirom na linearnost, selektivnost, specifičnost, točnost, natančnost, absolutni in relativni metriks efekt ter stabilnost. Linearnost meritev je bila določena v območju od 50 do 5000 μg/L za imatinib in nilotinib in v območju od 2.5 do 250 μg/L za dasatinib, s koeficientom korelacije večjim od 0,997. Limita kvantifikacije (LLOQ) je bila določena pri 50 μg/L za imatinib in nilotinib ter pri 2.5 μg/L za dasatinib. Metoda se je izkazala za točno (% bias ( 13.2) in natančno (CV (%) ( 10.3%) tako na dnevni kot tudi meddnevni ravni. Matriks vzorca (%ME = 94.5-106.7) in različne vrednosti hematokrita niso imele pomembnega vpliva na točnost in natančnost meritev. Stabilnost vzorcev na DBS karticah smo potrdili pri sobni temperaturi in v hladilniku, nestabilnost smo opazili le pri shranjevanju vzorcev z dasatinibom pri 40°C. Z razvito metodo smo uspešno analizirali klinične vzorce bolnikov s KML.
COBISS.SI-ID: 3292273
Izhodišča: V zadnjih desetih letih je imatinib (IM) močno izboljšal napoved izida bolezni pri bolnikih s kronično mieloično levkemijo (KML). Toda 30 % bolnikov še vedno ne doseže želenih ciljev zdravljenja ali pa se po določenem času od njih ponovno oddalji. V zadnjih treh letih v literaturi kot možni dejavnik uspešnosti oz. neuspešnost zdravljenja KML omenjajo koncentracijo IM v plazmi (KIP). Zato smo prvič v Sloveniji analizirali povezavo KIP z uspešnostjo zdravljenja KML in jo opredelili kot glavni molekularni odgovor (MMR) do 18. meseca zdravljenja. Bolniki in metode: Vključili smo 75 bolnikov s KML, ki so se v proučevanem obdobju zdravili z IM in so imeli ob diagnozi kronično oziroma pospešeno obdobje KML. Vzorce krvi za določanje KIP smo pošiljali v referenčni laboratorij v Bordeauxu. Vzpostavili smo metodo določanja KIP v Sloveniji. Rezultati: KIP pri bolnikih, ki so prejemali 400 mgIM ni bila statistično značilno povezana z doseganjem MMR do 18. meseca zdravljenja (p = 0,30). Starost in čas od predzadnjega odmerka IM nista bila statistično značilno povezana s plazemsko koncentracijo IM (p = 0,47 oz. 0,80). Spol in odmerek sta bila statistično značilno povezana s koncentracijo (za oba p ( 0,01). Zaključki: Jasne povezave med KIP in doseganjem MMR do 18. meseca zdravljenja nismo dokazali.Menimo, da bi bilo določanje koncentracije smiselno pri bolnikih, ki ne dosegajo splošno sprejetih meril za uspešen potek zdravljenja, pri bolnikih, ki imajo močno izražene stranske učinke IM in pri bolnikih, ki ob jemanju IM prejemajo druga zdravila s klinično pomembnimi farmakokinetičnimi interakcijami.
COBISS.SI-ID: 2978417
Izhodišča: Imatinib je prvo usmerjeno zdravilo pri zdravljenju kronične mieloične levkemije (KML). Odziv bolnikov na zdravljenje z imatinibom je odvisen tudi od vstopa učinkovine v tarčno celico z organskim kationskim prenašalcem 1 (OCT1). Na osnovi privzema radioaktivno označenega imatiniba v mononuklearne (MNC) celi - ce bolnikov pred začetkom zdravljenja je že bila dokazana povezava med aktivnostjo OCT1 prenašalcev in uspešnostjo zdravljenja. Domneva se, da bi določanje aktivnosti OCT1 pri bolnikih s KML lahko prispevalo k napovedi uspešnosti zdravljenja z imatinibom. Metode: MNC in granulocite (Gran) zdravega prostovoljca smo pred ali po ločevanju na Ficoll-u inkubirali v raztopini imatiniba s prazosinom oz. brez. Celice smolizirali s tekočim dušikom, nato pa iz lizata z mešanico organskih topil ekstrahirali imatinib. Vsebnost učinkovine v eks - traktu smo določili z metodo LC-MS/MS. Rezultati: Največji privzem imatiniba smo izmerili v predhodno ločenih Gran, v katerih je bila znotrajcelična koncentracija imatiniba skoraj 10-krat večja kot v ostalih vrstah celic. Ob dodatku prazosina (inhibitor OCT1) so bile znotrajcelične koncentracije imatiniba statistično značilno nižje tako v MNC (1,49 Ž 0,11 vs. 17,8 Ž 1,6 mg/L) kot tudi v Gran (96,2 Ž 2,2 vs. 191,2 Ž 7,7 mg/L), inkubiranih z učinkovino po ločevanju na Ficoll - -u. Absolutna aktivnost OCT1 je bila največja v Gran (6,27 Ž 0,66 ng imatiniba/200000 celic). Zaključki: Razvili smo postopek za določanje privzema imatiniba v levkocite, ki ne temelji na uporabi radioaktivno označenih spojin. Z njim želimo preveriti povezanost aktivnosti OCT1 z uspehom zdravljenja z imatinibom tudi na slovenski populaciji bolnikov s KML.
COBISS.SI-ID: 3414641