Genomska in evolucijska analiza novih predstavnikov cistatinske naddružine pri različnih prokariontih
F.02 Pridobitev novih znanstvenih spoznanj
COBISS.SI-ID: 37001989Iz naše študije lahko potegnemo tri glavne zaključke. Prvič, pridobitev novih virulentnih dejavnikov za patogene bakterije s pomočjo horizontalnega prenosa genov iz evkariontih je zelo redka in doslej še ni bila podrobno analizirana. Drugič, čeprav so dokazali, da so proteaze pomembni virulentni dejavniki prokariontskih patogenov in eukariontskih parazitov na vseh stopnjah okužbe, pa obstaja zelo malo primerov, ko inhibitorji proteaz omogočajo patogenom da inficirajo evkariontske gostitelje in sicer z inhibicijo njihovih proteaz. Tretjič, bakterijski stefini in cistatini s širokimi inhibitornimi spektri za različne družine cisteinskih proteaz so še posebej primerni za inhibicijo številnih gostiteljevih proteaz med okužbo. Zato so bakterijski stefini in cistatini novi virulentni dejavniki, ki lahko delujejo pri invaziji in razširjenju patogenov.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 27333415Funkcionalno in strukturno smo okarakterizirali dva stefina iz patogenih bakterij. Strukturno podprta poravnava proteinov je pokazala, da imajo bakterijski stefini in cistatini ohranjena inhibitorna motiva QXVXG in N -terminalni Gly. Nimajo pa PW ali PG motiva, ki je ohranjen pri evkariontskih cistatinih. To kaže na to, da je bila njihova cistatinska domena prilagojena na inhibicijo širšega nabora cisteinskih proteaz. Da bi dokazali, da so bakterijski stefini biokemijsko aktivni, smo izrazili Vibrio cholerae stefin (hipotetični protein VCA0935) in Bacteroides fragilis fuzijski inhibitor, ki vsebuje chagasinsko in cistatinsko domeno (hipotetični protein BF1388). Analizirali smo inhibitorne lastnosti rekombinantnih proteinov VCA0935 in BF1388 ter določili njihove interakcijske konstante z različnimi cisteinskimi proteazami (katepsini L, S, K, V, B in z papainom). Ugotovili smo, da VCA0935 in BF1388 rekombinantna proteina delujeta kot hitra in močna inhibitorja endopeptidaznih katepsinov K, S, V, L in papaina, njihova inhibicija eksopeptidaze katepsina B pa je bila šibkejša. Zelo zanimivo je, da patogenski stefini inhibirajo endopeptidazno aktivnost katepsinov S, K, L in V, ki so vsi pomembni akterji imunskega sistema.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 27092519