Citokromi P450 (CYPi) katalizirajo raznolike reakcije in so ključni encimi v glivnem primarnem in sekundarnem metabolizmu, ter pri razstrupljanju ksenobiotikov. Encimske lastnosti ter substratna specifičnost CYPov določajo produkte biokemijske reakcije. Vendar pa lahko na slednje vplivajo tudi redoks partnerji CYPov. Nitaste glive s številnimi CYPi imajo ponavadi več mikrosomalnih redoks partnerjev, reduktaz citokromov P450 (CPR). Pri rastlinski patogeni glivi Cochliobolus lunatus smo določili dve paralogni CPR, CPR1 in CPR2. Naš cilj je bil funkcijsko določiti dva endogena P450 monooksigenazna sistema ter osvetliti verjetne fiziološke vloge CPR1 in CPR2. Obe CPR smo rekonstituirali s CYP53A15, ali benzoatno 4-hidroksilazo iz glive C. lunatus, ki je ključna pri razstrupljanju rastlinskih fenolnih obrambnih spojin. Biokemijska karakterizacija s HPLC kaže, da obe reduktazi podpirata aktivnost CYP53A15, a imata različni produktni specifičnosti. V sistemu s CPR1, CYP53A15 pretvarja benzoat v 4-hidroksibenzoat, in 3-metoksibenzoat v 3-hidroksibenzoat. Ko je partner CPR2, sta oba substrata pretvorjena v 3,4-dihidroksibenzoat. Delecijske mutante in izražanje genov v miceliju, gojenem na medijih z inhibitorji, nakazujejo, da je CPR1 pomembna v primarnem metabolizmu, CPR2 pa je ključna pri razstrpljanju ksenobiotikov
COBISS.SI-ID: 4729882
Grosmannia clavigera je asociativna gliva podlubnika Dendroctonus ponderosae in patogen na boru Pinus contorta, ki mora biti odporna na terpenoidne smole in fenolne obrambne spojine gostiteljskega drevesa. G. clavigera se odzove na vdor monoterpenov s komplementarnimi mehanizmi, ki vključujejo izčrpavanje ter uporabo teh snovi kot vir ogljika. Citokromi P450 (CYP) so verjetno vključeni v metabolizem gostiteljevih obrambnih spojin. Identificirali in filogenetsko opredelili smo citokrome P450 glive G. clavigera. Pokazali smo, da se je družina citokromov P450 pri tej glivi v evoluciji skrčila, kljub temu pa je prišlo do podvojitve določenih genov. Analizirali smo transkriptomske podatke (RNA-seq) za ekspresijo CYP genov po tretiranju s terpeni ter floemskim ekstraktom bora, da bi določili CYP gene, ki so verjetno vključeni v razstrupljanje teh obrambnih spojin. Prav tako smo analizirali transkriptomske podatke glive, ki smo jo gojili na monoterpenih, trigliceridih oziroma oleinski kislini kot edinemu viru ogljika, z namenom ugotoviti kateri CYP geni so verjetno vključeni v razgradnjo teh spojin in s tem njihovo uporabo kot vir hrane. Končno smo ugotovili tudi gruče genov, ki so vključene v sintezo sekundarnih metabolitov, ki tudi vsebujejo CYP gene, ter gruče, ki verjetno sodelujejo pri pretvorbi gostiteljskih spojin.
COBISS.SI-ID: 30257113