V prispevku smo pokazali različno kinetiko nastajanja prostih oksidnih radikalov med lakazno-katalizirano oksidacijo lignoceluloznih vlaken (sisal in kokos) z različno vsebnostjo kemično različnega lignina. Kinetiko nastajanje dolgoživih radikalov smo ovrednotili direktno z EPR, medtem ko smo kinetiko kratkoživih radikalov določili s spinsko EPR metodo, kjer smo uporabili DMP tako za lovljenje kot tudi identifikacijo vrste in količine radikalov, ki so nastali zaradi delovanja lakaze ali kot posledica sekundarnih radikalskih reakcij.
B.06 Drugo
COBISS.SI-ID: 14101526V prispevku, ki je bil objavljen kot prispevek vabljenega predavanja prof. J. Štrancarja, smo pokazali strategijo za nadzorovano spremljanje lakazne oksidacije fenolnih substratov, kafeične in galične kisline kot monomerov in komercialnih ligninov kot kompleksnih polimerov, in njihovo polimerizacijo, kismo jo sledili s HPLC-SEC. Prenos elektronov in stabilnih radikalskih intermediatov smo detektirali z CV in EPR spektroskopijo. Oksidacijo mediatorjev smo določili preko stabilnih vodo-topnih nitroksidnih radikalov, medtem, ko smo generiranje kratko-živih radikalov in njihovo kinetiko redukcije merili s spinskim lovilcem DMPO, sposobnim spremembe kratko-živih radikalov v dolgo-žive radikalske DPMO-adukte.
B.05 Gostujoči profesor na inštitutu/univerzi
COBISS.SI-ID: 15421462Molekularne študije kažejo, da sta raznolikost in struktura bakterijskih lakaz v različnih okoljih zelo različni, a so lakazni geni znotraj vrst ohranjeni (primer Bacillus subtilis). Pregled 2200 bakterijskih genomov (novi verjetnostni model pHMM) je odkril več kot 1200 domnevnih genov za lakaze, pokazali smo njihovo mobilnost znotraj kraljestva bakterij ter širok razpon njihovih verjetnih fizioloških funkcij. Podatki kažejo visoko variabilnost optimalnih vrednosti pH in temepratur za njihovo delovanje, zato bakterijske lakaze predstavljajo pomemben vir za prihodnje biotehnološke inovacije.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4129656Delo je doktorska disertacija, v kateri je dobršen del posvečen delovanju lakaze v prisotnosti fenolnih in njim podobnih substanc. V delu so uporabljene kemijske in fizikalne metode za karakterizacijo katalitskega delovanja lakaz ter za opis kinetike in končnih produktov delovanja teh encimov na različne fenolne substance. Poznavanje metod in pridobljeno znanje o delovanju lakaz sta bili potrebni osnovi za uporabo teh encimov pri funkcionalizaciji lignoceluloznih površin.
F.03 Večja usposobljenost raziskovalno-razvojnega osebja
COBISS.SI-ID: 771959Delo je doktorska dsertacija, ki predstavlja prvo tovrstno raziskavo v Sloveniji in inovacijo tudi v svetovnem smislu, saj so se prehodne raziskave predvsem usmerjale na področje glivnih lakaz. Bakterijske lakaze so oksidoreduktaze, ki sklapljajo oksidacijo fenolnih in drugih snovi z redukcijo kisika do vode. Zanimive so za uporabo v različnih biotehnoloških aplikacijah, najbolj pa so preučene pri glivah, čeprav jih najdemo v vseh živih bitjih. Pričujoče delo se ukvarja z bakterijskimi lakazami, njih pojavnostjo in raznolikostjo pri bakterijah ter s preučevanjem genov za te encime neposredno v naravi. Izbrano okolje so bila izsuuševana šotna tla Ljubljanskega barja, ki zaradi pestre mikrobne zdužbe in naravne prisotnosti fenolnih snovi predstavljajo potencialno zanimiv vir novih genov za lakaze. V njih smo z metodo kloniranja in določanja nukleotidnega zaporedja prepoznali več skupin povsem novih genov za lakazam podobne encime. Z bioinformatskimi analizami sekvenciranih genomov smo ugotovili prisotnost takih genov v vseh bakterijskih deblih ter zbrali več dokazov o njihovi mobilnosti znotraj bakterijske domene. V zadnjem delu smo gen za lakazo iz bakterije Thioalkalivibrio sp. heterologno izrazili, očistili in osnovno biokemijsko opredelili. Novi encim je alkalifilna lakaza, ki lahko oksidira fenolne snovi v bazičnem pH, kar je zanimiva lastnost za potencialno uporabo v biotehnologiji.
F.03 Večja usposobljenost raziskovalno-razvojnega osebja
COBISS.SI-ID: 4370040