Celične linije pridobljene iz biopsij kože pacientov z epidermolysis bullosa simplex so, kot in vitro modelni sistem, bile od izjemnega pomena za spoznavanje vloge keratinskega citoskeleta v epitelijskih celicah v normalnih pogojih rasti in bolezni. Ker pristopi genske terapije zaenkrat še niso imeli večjega uspeha pri zdravljenju te skupine bolezni, se je pojavil kot možen pristop tudi uporaba majhnih molekul, oz. testiranje knjižnic novih ali pa že obstoječih aktivnih spojin. Tudi v te namene se kot in vitro modelni sistemi pogostoma uporabljajo celične linije pridobljene od pacientov. Žal se raziskovalci pogostoma ne zavedajo pomena in posledic uporabe takšnih celičnih linij za testiranje učinkovitosti spojin. V tem primeru gre predvsem za izbiro najbolj optimalnih pogojev rasti celičnih linij, ki izvirajo iz različnih oseb in posledično imajo tudi različno genetsko ozadje. V tem članku predstavljamo vpliv različnih dejavnikov na odgovor celic v najbolj pogostoma uporabljenih celičnih testih (testi proliferacije, metabolične aktivnosti in migracije), ki lahko celo pripeljejo do napačnih zaključkov. rezultati omenjenih testov so pogostoma od bistvenega pomena pri selekciji aktivnih spojin za nadaljnja testiranja kot novih učinkovin za zdravljenje določenih bolezni.
COBISS.SI-ID: 30115545
V tej raziskavi smo predstavili nov pristop dostave rekombinantnih proteinov, ki temelji na uporabi inkluzijskih teles. Kot gostiteljski sistem smo izbrali konvencionalni sev E.coli, medtem ko je naš modelni protein keratin 14. Keratini so kompleksni polimeri, ki tvorijo mrežo keratinskega citoskeleta. Da bi nastali filamenti je potrebno, da se prvo monomerni keratin 14 poveže v dimerne podenote s keratinom 5, nato pa šele iz dimernih podenot nastanejo posamezni filamenti. Naši rezultati kažejo, da bi se inkluzijska telesa lahko uporabila za razvoj novega dostvanega sistema keratinov v celice kože in, predstavlja nov možen pristop za zdravljenje skupine bolezni, ki jo poznamo pod skupnim imenom epidermolitična buloza.
COBISS.SI-ID: 5014298
Epidermolysis bullosa simplex je bolezen krhkosti kože, ki jo povzročajo mutacije v keratinih K5 in K14. Za EBS ni zdravila. Ko so EBS keratinociti gojeni in vitro, lahko opažamo agregate keratinskih filamentov, ki spominjajo na agregate, ki nastajo pri drugih boleznih napačnega zvijanja proteinov. Za slednje je znano, da se fenotip bolezni lahko izboljša (ublaži) z uporabo molekularnih čeperonov ali pa z aktivacijo ubikvitinproteozomskega sistema. V tej raziskavi smo sledili spremembam na nivoju MAP kinaznega signaliziranja po izpostavljanju EBS keratinocitov temperaturnemu stresu (43C, 30 min) in uporabi dveh kemjskih čeperonov, trimethylamine Noxide (TMAO) in 4phenylbutyrate (4PBA). V raziskavi smo uporabili tudi MAPK inhibitorje, ter inhibitorje proteozomskega sistema. Tretman EBS keratinocitov s TMAO ali 4PBA je izjemno znižalo nastajanje keratinskih agregatov. Obenem, TMAO vpliva tudi na aktivacijo p38 in JNK MAP kinaz, ter izražanje heatshock proteina HSPA1A, ki kolokalizira s fosforiliranim keratinom 5 v EBS keratinocitih. V naši raziskavi smo odkrili nove tarčne proteine, ki odpirajo pot za razvoj novih terapevtskih pristopov.
COBISS.SI-ID: 28273369