Arheja Aeropyrum pernix K1 proizvaja biotehnološko zanimive encime, med njimi je tudi pernizin. Pernizin je termostabilna proteaza. Pernizin je lahko uporaben v kemični industriji kot dodatek k čistilnim sredstvom ali pa za razgradnjo zdravju škodljivih proteinskih agregatov, kot so na primer infektivni prioni PrPSc. Uspešno smo izolirali in opisali zunajcelično, od Ca2+ modulirano serinsko proteazo pernizin. Pridobili smo okoli pol miligrama pernizina iz 6,4 litra gojišča po dvodnevnem gojenju arheje. Heterologno izražanje pernizina smo preizkusili z uporabo manj znanih ekspresijskih sistemov, Streptomyces rimosus in Streptomyces lividans, ter že uveljavljenega E. coli. Ko smo uporabili neoptimiziran genski zapis pernizina, nismo zaznali proteina, medtem ko smo z optimiziranim genskim zapisom (pernizinCOS) potrdili rekombinanten pernizin z imunodetekcijo. Aktivnost encima smo dokazali s cimografijo. Pri S. lividans nismo uspeli dokazati izražanja rekombinantne oblike pernizina. V vektorje za E. coli smo vgradili nespremenjen zapis za pernizin (pernizin), kodonsko prilagojen zapis pernizina (pernizinCOE) in mutante (pernizinCOS355AE). Izražanje rekombinantnega pernizina smo zaznali samo pri konstruktih z optimiziranim genskim zapisom, čeprav smo za izražanje naravnega genetskega zapisa uporabili sev, namenjen odpravljanju težav izražanja zaradi redkih kodonov. Protein smo identificirali z MS/MS in z določitvijo N-končnega aminokislinskega zaporedja. Vzorce čistega rekombinantnega pernizina in pernizina pridobljenega iz arheje smo nadalje uporabili za fizikalne in biokemijske študije.
D.09 Mentorstvo doktorandom
COBISS.SI-ID: 267092992V patentu smo opisali metodo razgradnje proteinskih depositov in prionskega proteina s serinsko proteinazo. Predstavili smo področja uporabe te metode.
F.32 Mednarodni patent
COBISS.SI-ID: 4197240Učbenik za laboratorijske vaje pri predmetu fizikalnokemijske metode v živilstvu na magistrskem študiju živilstva. Obravnava denzimetrijo, termodinamsko aktivnost vode, potencimetrijo, konduktometrijo, spektroskopijo in kromatografske metode.
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 253834496Član programske skupine je sodeloval in pomagal soustvariti televizijsko oddajo Ugriznimo znanost: z vitamini v pomlad. V okviru oddaje je skozi pogovor in eksperimente predstavil nekatere značilnosti vitamina C povezane z vsebnostjo v različnih živilih ter stabilnostjo vitamina pri različnih postopkih priprave hrane. Predstavljene vsebine v oddaji se tesno povezujejo z vsebinami in delom v okviru programske skupine.
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 3220337Učbenik je namenjen študentom doktorskega študija Bioznanosti na Univerzi v Ljubljani pri izbirnem predmetu »Antioksidanti in metodologija določanja antioksidativne učinkovitosti« (nosilec predmeta Helena Abramovič). Učbenik obravnava problematiko lipidne oksidacije v živilih, posreduje znanja povezana z uporabo antioksidantov in nas seznanja z metodologijo določanja antioksidativne učinkovitosti.
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 256199424