Poznamo dva tipa eksocitoze, popolno in prehodno, prva je prevladujoča oblika v melanotrofih, ki so zato primerni za merjenje celokupne eksocitoze. Sfingolipid sfingozin aktivira protein VAMP2 za združevanje kompleksa SNARE, ki je pomemben v membranski fuziji. Ugotovili smo, da sfingozin, kot tudi njegov strukturni homolog fingolimod povišata eksocitozo, če ju dodamo zunajcelično. Nadalje smo preverili eksocitozo v laktotrofih, kjer je prevladujoč tip prehodna eksocitoza. Eksocitozo smo spremljali tako, da smo merili diskretne spremembe membranske kapacitivnosti, ki je sorazmerna spremembam v površini plazmaleme. V prisotnosti sfingozina se je frekvenca prehodne in popolne fuzije povišala. Mešički z večjim premerom so prešli v popolno fuzijo, medtem ko so manjši mešički ostali ujeti v prehodni eksocitozi. Označevanje s fluorescentnimi protitelesi, ki prepoznajo prolaktin (PRL) je pokazalo, da je bil povprečni premer izločene a nerazgrajene vsebine mešičkov večji kot premer neizločenih mešičkov. S pomočjo protiteles, ki prepoznavajo hormon PRL in VAMP2 smo ugotovili, da je intenziteta signala VAMP2 neodvisna od premera PRL mešičkov, hkrati pa je bila gostota VAMP2 signalov manjša v večjih mešičkih. Rezultati kažejo, da s sfingozinom posredovana uravnavana eksocitoza ni povezana samo s številom kompleksov SNARE na posameznem mešičku, ampak je odvisna tudi od velikosti mešičkov, ki lahko pomembno vplivajo na prehod iz prehodne v popolno eksocitozo.
D.09 Mentorstvo doktorandom
COBISS.SI-ID: 784247Visokoločljivostna mikroskopija je napredna tehnologija, kjer dosežemo ločljivost, ki je vsaj dvakrat boljša od ločljivosti običajne svetlobne mikroskopije. Organizacija srečanja, ki je spremljal uradni začetek mikroskopije STED v Sloveniji. Eden od ključnih instrumentov visokoločljivostnih mikroskopij predstavlja mikroskop STED, ki ga imamo sedaj tudi v Sloveniji. Mikroskop STED, ki je sestavljen iz najbolj naprednih optičnih, mehanskih in električnih komponent, predstavlja instrument, ki omogoča meritve na meji danosti. Mikroskop STED omogoča vizualizacijo živih celic z ločlivostjo med 35 in 40 nm, v idealnih pogojih pa okoli 30 nm. Znanstveno srečanje z delavnico visokoločljivostne mikroskopije je bilo namenjeno predstavitvi tovrstne mikroskopije.
B.01 Organizator znanstvenega srečanja
COBISS.SI-ID: 2814543