Proliferacija mioblastov in njihova fuzija v mišične cevčice sta kritična dogodka v procesu mišične regeneracije. Citokinski odziv in vnetni odziv skeletne mišice na poškodbo imata pomebno vlogo pri uravnavanju proliferacije in diferenciacije mišičnih prekurzorjev v procesu mišične regeneracije. V študiji smo želeli ugotoviti, ali je vpliv pro-vnetnih dejavnikov, kot sta TNF-alfa in lipopolisaharid, ki pospešujeta izločanje citokinov interlevkina 6 (IL-6) in interlevkina 1 (IL-1) iz omenjenih prekurzorjev, odvisen od stopnje diferenciacije prekurzorjev mišične regeneracije. Ugotovili smo, da na stopnji mioblastov pretretiranje s pro-vnetnimi dejavniki signifikantno poveča izločanje IL-6, ne vpliva pa na izločanje IL-1. Na ravni mišičnih cevčic je spodbujevalni učinek na izločanje IL-6 še vedno prisoten vendar ne tako izrazit, zaznan pa je bil tudi učinek v smislu povečanja izločanja IL-1. Ti rezultati kažejo, da pretretiranje z provnetnimi dejavniki povzroči spodbujeno izločanje IL-6 in/ali IL-1 v kulturi človeške mišice v obdobju po pretretiranju. Rezultati so tudi pokazali, da je citokinski odziv na ravni prekurzorjev mišične regeneracije odvisen od stopnje diferenciacije.
COBISS.SI-ID: 36675589
Acetilholinesteraza in agrin sta beljakovni, ki imata poleg vloge v holinergičnem sistemu, še vrsto drugih vlog, ki niso povezane s holinergičnim sistemom. Naše raziskave so usmerjene v alternativne vloge teh dveh beljakovin v procesu mišičnega razvoja in regeneracije. V prejšnji študiji smo odkrili vlogo agrina v razvoju vzdražnosti mišičnih celic, v tej študiji pa smo proučevali vlogo agrina na izločanje miokina interlevkina 6 (IL-6) iz mioblastov, kot najzgodnejših prekurzorjev mišične regeneracije. Ugotovili smo, da agrin pospešuje izločanje IL-6 iz mioblastov. Kot kaže gre pri tem za splošen učinek, saj smo ga ugotovili na vseh preučevanih modelih: primarni kulturi človeških in mišjih mioblastov in v mišični celični liniji C2C12. Ta učinek agrina je izzvenel po fuziji mioblastov v mišične cevčice, a se je v kulturi in vitro oživčenih mišičnih cevčic spet pojavil v fazi oživčenja . Rezultati so ponovno pokazali, da ima agrin poleg svoje klasične vloge pri razvoju živčnomišičnega stika tudi druge izven-sinaptične in ne-holinergične učinke v razvoju skeletne mišice , ki so kot kaže razvojno-specifični in je v tem pogeldu podoben acetilholinesterazi.
COBISS.SI-ID: 31114201
Acetilholinesteraza (AChE) in agrin imata poleg njune klasične vloge v razvoju živčnomišičnega stika (ŽMS) in v ŽM prenosu tudi številne druge ne-holinergične in izven-sinaptične vloge. Na to kažejo tudi številne skupne lastnosti obeh proteinov, kot sta njun izvor tako v mišici kot v motoričnem nevronu, nameščenost na sinaptični bazalni lamini ŽMS, izražanje v celicah, ki niso del holinergičnega sistema, v sintezi obeh proteinov pa srečamo tudi proces alternativnega pripajanja. Ob hipotezi, da imajo beljakovine, ki so namenjene vezavi na bazalno lamino v ŽMS in ki jih izraža motorični nevron enak časovni vzorec izražanja v motoričnem nevronu, smo primerjali izražanje AChE, kolagenskega repa ColQ, s katerim je AChE pričvrščena na bazalno lamino ŽMS in podenote agrina, ki je vezana na bazalno lamino ŽMS, z izražanjem podenot agrina, ki niso vezane na bazalno lamino ŽMS. Ugotovili smo enak časovni vzorec izražanja komponent ŽMS, ki so vezane na bazalno lamino, ta vzorec pa se je razlikoval od časovnega vzorca beljakovin, ki niso vezane (edinole) na bazalno lamino. Rezultati kažejo, da je poleg agrina vsaj deloma živčnega izvora tudi AChE. V študiji so opisane tudi alternativne vloge obeh omenjenih beljakovin. Poleg že prej odkrite vloge AChE v procesu apoptoze, smo ugotovili tudi, da agrin vspodbuja sintezo in zorenje težkih verih miozina in s tem posredno vzpodbuja razvoj mehanizma kontrakcije v razvijajoči se skeletni mišici. Te ugotovitve še dodatno potrjujejo ugotovitve drugih raziskovalcev o izven-sinaptični vlogi AChE in agrina in pomenu obeh proteinov ne samo v razvoju in delovanju ŽMS, temveč tudi v razvoju skeletne mišice.
COBISS.SI-ID: 30270681
V skeletnih mišicah malih sesalcev so izražene tri hitre izooblike težkih verig miozina (MyHC), t.j. MyHC-2a, -2x in -2b. V humanih mišicah pa sta bili do sedaj dokazani le izoobliki MyHC-2a in -2x. Znano je, da je v funkcionalno bolj specializiranih mišicah grla izraženih več izooblik MyHC. Čeprav so bili mRNK prepisi gena za izoobliko MyHC-2b izraženi v nekaterih humanih skeletnih mišicah in mišicah grla, pa ustrezna izooblika ni bila dokazana. Kot prvi smo z uporabo tehnike hibridizacije in situ v humanih mišicah grla dokazali ne le prisotnost prepisov za MyHC-2b, temveč s pomočjo imunohistokemije tudi ustrezno beljakovino, t.j. MyHC-2b izoobliko, ne pa s tehniko poliakrilamidne gelske elektroforeze. Z uporabo več monoklonskih protiteles, specifičnih za izooblike MyHC, smo ugotovili, da je bila izooblika MyHC-2b v vlaknih vedno izražena skupaj z ostalimi glavnimi izooblikami MyHC in sicer ne le s hitrimi izooblikami (MyHC-2a in -2x), temveč tudi s počasno izoobliko (MyHC-1).
COBISS.SI-ID: 31191001
Proučevanje učinka staranja na kapilarno mrežo v skeletnih mišicah so dale nasprotujoče rezultate tako v humanih kot v mišicah živali. Delno so posledica neprimerljivih in pristranskih metod uporabljenih na tankih prečnih rezinah, predvsem pri mišicah z zapleteno morfološko zgradbo kot je mišica maseter. V prispevku predstavljamo novo imunohistokemično metodo za barvanje kapilar in mišičnih vlaken v 100 µm debelih rezinah in nov pristop k 3D prikazu kapilar in mišičnih vlaken. Z uporabo konfokalnega mikroskopa in 3D stereološke mrežice in zasledovanjem kapilar v virtualnem prostoru smo v mišici maseter mladih in starih oseb z nepristransko metodo ugotavljali dolžino kapilar v volumnu mišice, dolžino kapilar ob mišičnem vlaknu na dolžino, površino in volumen vlakna. Ugotovitve kažejo, da je anatomska kapilarizacija pri starejših osebah dobro ohranjena, kapilarna mreža pa se s starostjo preoblikuje, kar je verjetno odgovor na s starostjo pogojeno spremenjeno funkcijo mišice in pretvorbe mišičnih vlaken.
COBISS.SI-ID: 30985945