Študirali smo sklopitev tankoplastne kromatografije z masno spektrometrijo (TLC-MS) za potrebe analiz monomernih flavanolov in proantocianidinov v vzorcih s kompleksno matrico. Optimizirali smo elucijske pogoje za TLC-MS in za MS detekcijo spojin primerjali uporabo dveh različnih načinov zajemanja podatkov, to sta polni ionski tok in opazovanje izbranih reakcij. Preverili smo učinkovitost silikagelnih in celuloznih plošč v TLC-MS v kombinaciji z različnimi topili za razvijanje. Pri celuloznih ploščah smo dobili boljšo občutljivost, ker je uporaba silikagelnih plošč rezultirala v ionski supresiji. Ta učinek smo zmanjšali, če smo med elucijsko glavo in masni spektrometer vstavili HILIC predkolono, tako da smo lahko detektirali monomerne spojine. Nov celovit TLC x MS presejalni postopek za določanje flavanolov v celotnem kromatogramu je bil razvit kot alternativa določitvi lokacije spojin na plošči z detekcijskim reagentom na osnovi 4-dimetilaminocimetovega aldehida. Razviti postopek smo uporabili za detekcijo flavanolov v olupku granatnih jabolk in v semenih navadnega brina, v katerih smo prvič detektirali flavanole in dimere ter trimere proantocianidinov.
COBISS.SI-ID: 36620037
Pokazali smo, da je eden glavnih faktorjev pri direktnem določanju luteina v špinačnih ekstraktih ponovljiva in stabilna kromatografija. To smo dosegli z uporabo C30 kolone in mobilne faze v sestavi aceton-0,1 M trietilamonijev acetatni pufer pH 7 (TEAA) 9:1. Izkoristek ekstrakcije luteina iz 10 mg liofilizirane špinače z 10 mL ekstrakcijskega topila (etanol, aceton, etanol-etil acetat 1:1 (v/v), metanol-THF 1:1 (v/v)) je bil vedno enak. Ekstrakcija je potekala 15 minut v dušikovi atmosferi z mešanjem. Izkoristek se je povečal, če smo k ekstrakcijskim topilom dodali 15 % 1 M TEAA pufra (pH 7). Z ovrednotenjem natančnosti smo pokazali, da med ekstrakcijo ne pride do izgub luteina (RSD ( 5%, n=3). Z dodatkom 15 % TEAA k acetonu smo dosegli boljši izkoristek ekstrakcije tudi v primeru neliofilizirane špinače. Vsebnost luteina v različnih vzorcih špinače se je gibala od 5 do 15 mg/100 g sveže mase. Razvili smo prvo separacijo vseh karotenoidov in klorofilov na C18 »core-shell« koloni, in z dodatkom 15 % TEAA acetonu izboljšali izkoristek ekstrakcije beta-karotena v primerjavi z ekstrakcijo z acetonom.
COBISS.SI-ID: 5168410
Dosegli smo ločbo treh triterpenskih kislin (ursolna, oleanolna in betulinska kislina) na različnih TLC (silikagel 60) in HPTLC sorbentih (silikagel 60, C-2 RP in C-18 RP) z uporabo topil za razvijanje v sestavi nepolarnega n-heksana in estra (metil acetat, etil acetat, etil propionat) kot selektorja. Detekcijo smo izvedli z reagenti z anisaldehidom in molibdofosforno kislino. Razvili smo enostavno metodo na C-18 RP HPTLC plošči z uporabo topila za razvijanje v sestavi n-heksan-etil acetat (5:1 v/v) in razvijanjem v horizontalni kadi. Metodo smo uporabili za presejalne analize za določanje ursolne, oleanolne in betulinske kisline v različnih ekstraktih zelenjave. Ostali rastlinski triterpenoidi (lupeol, alfa-amirin, beta-amirin, cikloartenol, lupenon, friedelin, lupeol acetat, cikloartenol acetat) in fitosterola (beta-sitosterol, stigmasterol) niso motili analiz. TLC-MS smo uporabili kot orodje za dodatno potrditev prisotnosti ursolne, oleanolne in betulinske kisline v ekstraktih zelenjave. Ursolno in oleanolno kislino smo prvič detektirali v radiču Leonardo in belem radiču di Castelfranco, medtem ko betulinske kisline z MS nismo zaznali v jajčevcu, kot je sprva nakazala TLC analiza. Predhodno kromatografsko bromiranje na HPTLC silikagel 60 ploščah in kasnejše razvijanje v toluen-kloroform-dietil eter-metanojska kislina (20:16:4:0,1 v/v) je omogočilo boljšo ločljivost med temi analiti.
COBISS.SI-ID: 5206810
Razvili smo izokratsko HPLC metodo za določanje osmih ksantofilov (lutein, kapsantin, zeaksantin, kantaksantin, beta-apo-8'-karotenal, etil-8'-apo-beta-karotene-8'-oat, citranaksantin in beta-kriptoksantin; vsi so registrirani aditivi za perutninsko krmo) v jajčnem rumenjaku. Optimalno ločbo vseh E izomer teh ksantofilov smo dosegli v manj kot 18 min na ProntoSIL C30 koloni pri 27 °C z uporabo mobilne faze v sestavi aceton-metanol-0,5 M trietilamonijev acetatni (TEAA) pufer pH 7 14:5:1 (v/v) in pretokom 1 mL/min ter spektrofotometrično detekcijo pri 450 nm. Potrdili smo tudi uporabnost drugih mobilnih fazi kot sta aceton-voda 93:7 (v/v) in aceton-metanol 1:4 (v/v). Ovrednotili smo tudi vpliv temperature in dodatka TEAA mobilni fazi na povečanje ploščin vrhov. Testno raztopino rumenjaka smo pripravili tako, da smo vorteksirali 0,5 g rumenjaka v 10 mL acetona, čemur je sledilo 15 min mešanja v dušikovi atmosferi in nato centrifugiranje. Metodo smo validirali za 5 analitov. Kalibracijsko območje je bilo 0,04 in 2 mu g/mL, povprečna točnost analitov 95 %, potrdili smo tudi, da je metoda natančna (RSD ( 5%); eksperimenti so bili izvajedeni na treh nivojih v treh paralelkah. Analize jajc iz štirih vrst načinov reje so pokazale prisotnost do štirih ksantofilov (lutein, zeaksantin, kantaksantin in etil-8'-apo-beta-karoten-8'-oat) in sledove beta-kriptoksantina.
COBISS.SI-ID: 5334042
Pri procesu praženja kave pride do velikih sprememb v sestavi kavnih zrn. Med drugim se tvorijo obarvani melanoidini, ki predstavljajo Maillard-ove produkte z visoko molekulsko maso. Predstavljen je nov pristop za kontrolo vpliva pogojev praženja na antioksidativno kapaciteto melanoidinov in klorogenskih kislin (CGA) v kuhani kavi. Uporabili smo validirani Folin-Ciocalteu (FC) in ABTS presejalni metodi kot »on-line« antioksidativni presejalni metodi (po kolonsko) v povezavi z velikostno izključitveno kromatografijo visoke ločljivosti (HPSEC). HPSEC omogoča separacijo melanoidinov od CGA in določitev antioksidativne kapacitete posamezne frakcije v 25 minutah. Poleg »on-line« meritev smo obe presejalni metodi izvedli tudi »off-line« z analizo z direktnim injiciranjem (angl. »flow injection analysis« - FIA). Maksimalno antioksidativno kapaciteto smo določili pri rahlo do zmerno praženi kavi, merjeno tako z ABTS-FIA in FC-FIA kot tudi z »on-line« ABTS presejalno metodo. Z uporabo FC »on-line« presejalne metode smo določili maksimum pri zelo rahlem praženju kave. Z uporabo površin vrhov, dobljenih z novo sklopljeno tehniko, smo študirali vplive praženja na variabilnost vsebnosti melanoidinov in CGA v kuhani kavi. Večina melanoidinov se tvori v začetnih fazah praženja in tudi relativni prispevek melanoidinov k celokupni antoksidativni kapaciteti se povečuje proti temno praženi kavi, predvsem zaradi razpada CGA med praženjem. Vpeljali smo razmerje melanoidinov proti klorogenskim kislinam kot nov indikator stopnje praženosti kave.
COBISS.SI-ID: 36620293