V zadnjem času je velik poudarek je na razvoju jetrnih celičnih modelov, vključno z naprednimi in vitro tridimenzionalnimi (3D) celičnimi sistemi, ki bolje posnemajo obnašanje celic in vivo in ponujajo natančnejše in napovednejše podatke za izpostavljenosti ljudi. V študiji smo razvili pristop za testiranje genotoksičnosti na 21-dni starih sferoidih, ki smo jih pripravili iz človeških celic hepatocelularnega karcinoma (HepG2/C3A) z uporabo dinamičnega bioreaktorskega sistema klinostat (CelVivo BAM/ bioreaktor) v nadzorovanih pogojih. Sferoide smo izpostavili posredno delujočim genotoksičnim spojinam, policikličnim aromatskim ogljikovodikom [PAH; benzo(a)piren B(a)P] in heterociklični aromatski amin [PhIP]) pri necitotoksičnih koncentracijah. Rezultati so pokazali, da obe onesnažili značilno povišajo raven prelomov dvojne vijačnice DNA, kar smo ocenili s testom komet. Nadalje smo določali raven mRNA izbranih genov, ki kodirajo presnovne encime iz I in II faze, ter genov, ki se odzivajo na poškodbe DNA (qPCR). 21-dnevni sferoidi so pokazali višjo bazalno izražanje genov, ki kodirajo presnovne encime, v primerjavi z enoslojno celično kulturo. Študija je pokazala, da model sferoidov razvitih iz celic HepG2/C3A, ki jih gojimo v dinamičnih pogojih v klinostatu, predstavlja zelo občutljiv in obetaven in vitro model za določanje genotoksičnosti in za okoljske študije ter lahko značilno prispeva k zanesljivejši oceni genotoksičnih aktivnosti čistih kemikalij in kompleksnih okoljskih vzorcev tudi pri zelo nizkih koncentracijah, kar je pomembno za izpostavljenost ljudi v okolju.
COBISS.SI-ID: 36593667
V študiji smo uporabili napredni 3D celični model, ki smo ga razvili iz človeških celic hepatocelularnega karcinoma (HepG2) za oceno cito-/genotoksične aktivnosti cilindrospermopsina. Sferoide smo pripravili s prisilno plavajočo metodo in so jih tri dni gojili v statičnih pogojih preden smo jih izpostavili CYN. Vpliv CYN na rast sferoidov smo merili vsak dan, preživetje celic pa smo določali z MTS testom in barvanjem živih/mrtvih celic. Vpliv na celično proliferacijo, spremembe celičnega cikla in indukcijo poškodb DNA (gH2AX) smo določili s pomočjo pretočne citometrije. Nadalje smo preučevali izražanje izbranih genov (qPCR), ki sodelujejo pri presnovi ksenobiotikov, proliferaciji, odzivu na poškodbe DNA, apoptozi in oksidativnem stresu. Rezultati so pokazali, da je CYN v odvisnosti od koncentracije zmanjšal velikost sferoidov in vplival na delitev celic z ustavitvijo HepG2celic v fazi G1 celičnega cikla. Pri uporabljenih pogojih nismo zaznali povzročanja prelomov dvoverižne DNA v primerjavi s kontrolo. Analiza genskega izražanja je pokazala, da je CYN pomembno dereguliral gene, ki kodirajo presnovne encime I in II faze ter gene, ki sodelujejo pri celični proliferaciji, apoptozi in odzivu na poškodbe DNA. Napredni 3D celični model HepG2 zaradi svoje bolj zapletene strukture in izboljšanih celičnih interakcij, zagotavlja bolj fiziološko pomembne informacije in več napovednih podatkov o izpostavljenosti ljudi ter lahko tako prispeva k zanesljivejši oceni genotoksičnosti kemikalij, vključno s cianotoksini.
COBISS.SI-ID: 19219971
Celotno okolje možganskega tkiva se zelo razlikuje od katerega koli drugega tkiva in specifično mikrookolje, ki zajema niše matičnih celic in krvno-možgansko pregrado, pomembno vpliva na nizko stopnjometastaz glioblastoma iz možganov v ostala tkiva. Ta pregledobravnava splošne celične in molekularne poti, ki so do neke mere podobne pri metastazah v možgane in glioblastomu, vključno s cirkulirajočimi tumorskimi celicami (CTC) ter značilnostmi rakavih matičnih celic (CSC) in metastatskimi nišami
COBISS.SI-ID: 5208399
Kemokin CCL5/RANTES je vsestranski vnetni mediator, ki se veže na receptor CCR5, in spodbuja interakcije rakavih celic znotraj tumorskega mikrookolja. Z uporabo imunohistokemije smo v seriji vzorcev in celic glioblastoma, vključno z matičnimi celicami glioblastoma, identificirali CCL5 in CCR5. Ravni mRNK CCL5 in CCR5 so bile v vzorcih glioblastoma bistveno višje v primerjavi z nerakavimi možganskimi tkivi. In vitro invazija primarnih celic glioblastoma in matičnih celic glioblastoma, pridobljenih iz bolnikov, je bila odvisna od CCL5-inducirane signalizacije injo močno inhibira maravirok, antagonist CCR5. Pokazali smo da avtokrine in parakrine interakcije vglioblastomu, zlasti med glioblastomskimi matičnimi celicami in interakcijami s stromalnim mikrookoljem, vključujejo CCR5 in CCL5, kar prispeva k invaziji glioblastoma. CCL5/CCR5 sta tako potencialni terapevtski tarči pri glioblastomu, ki ju lahko ciljamo z že poznanim zdravilom maravirokom.
COBISS.SI-ID: 19416067
Zaradi povečane pogostosti cvetenja cianobakterij in pojavljajočih se dokazov o cianotoksičnosti v biofilmu so zanesljive metode za zgodnje odkrivanje nevarnosti cianotoksinov zelo pomembne za varovanje zdravja ljudi, živali in okolja. Kot dopolnitev sedanjih metod za oceno tveganja je bila namen te študije ovrednotiti izbrane teste qPCR za odkrivanje potencialno strupenih cianobakterij v okoljskih vzorcih. V enem letu je bilo iz 15 vodnih teles v Sloveniji zbranih 25 vzorcev planktona in 23 biofilmov. Opravljene so bile tri različne analize, ki so bile med seboj primerjane; qPCR, usmerjen v gene mcyE, cyrJ in sxtA, ki sodelujejo pri proizvodnji cianotoksinov, LC-MS / MS, ki kvantificira koncentracijo mikrocistina, cilindrospermopsina in saksitoksina ter mikroskopske analize, ki identificirajo potencialno strupene cianobakterijske taksone. Analize qPCR so odkrile potencialno strupene mikrocistine v 10 vzorcih jezerskega planktona in potencialno toksičnih celic iz rodu Planktothrix v 12 jezerskih planktonih in enem vzorcu jezerskega biofilma. Opazili smo pozitivno korelacijo med številom kopij genov mcyE in koncentracijami mikrocistina. V treh vzorcih biofilma v jezeru smo odkrili potencialne proizvajalce cilindrospermopsina in saksitoksina. Študija je pokazala potencial za proizvodnjo cianotoksinov, ki ga tradicionalne metode v vzorcih planktona in biofilma niso zaznale. Tako bi lahko bila metoda qPCR koristna pri rednem spremljanju vodnih teles, da bi izboljšala oceno tveganja in omogočila pravočasne ukrepe.
COBISS.SI-ID: 51505411