Vabljeno predavanje na Molecular interactions: minisymposium 2018, nov 2018, Ljubljana, Slovenija
B.04 Vabljeno predavanje
COBISS.SI-ID: 31874343V sodobni medicini je znanih veliko zdravil in terapevtskih pristopov, ki so namenjeni zdravljenju rakavih obolenj. Kljub temu pa se bolezen pogosto razvije v invazivno obliko, ki metastazira, ali pa pride do ponovnega pojava bolezni. Za omenjene procese naj bi bile odgovorne tumorske matične celice (TMC), manjša podskupina rakavih celic, ki je odporna na večino obstoječih terapevtskih pristopov in omogoča ponovni pojav tumorjev. Za izboljšanje terapije so tako potrebni novi terapevtski pristopi, ki bi bili poleg diferenciranih tumorskih celic učinkoviti tudi proti TMC. Obetavni tarči, z regulacijo katerih bi lahko izboljšali terapijo usmerjeno proti TMC, sta cisteinski lizosomski peptidazi katepsina B in X, saj imata pomembno vlogo v različnih procesih nastanka in napredovanja raka. V okviru magistrske naloge smo TMC izolirali iz treh celičnih linij raka dojke, MDA-MB-231, MCF7 in MCF-10A neoT, na podlagi tvorbe tumorskih sfer, kar je značilnost, po kateri se TMC razlikujejo od diferenciranih celic. V ta namen smo najprej izbrali optimalne pogoje za tvorbo tumorskih sfer. Kot najbolj ugodno se je izkazalo gojišče DMEM/F-12 z brezserumskim dodatkom za spodbujanje rasti TMC B-27 in rastnih faktorjev EGF in bFGF. Pri celicah MCF-10A neoT pa je potreben še dodatek inzulina in hidorkortizona. Uspešnost izolacije TMC smo potrdili na podlagi izražanja površinskih označevalcev in jedrnega transkripcijskega dejavnika matičnih celic SOX2. Delež celic s fenotipom TMC se je pri...
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 4885617Katepsin V je lizosomska cisteinska peptidaza iz družine papainu podobnih cisteinskih peptidaz. Katepsin V je zelo soroden katepsinu L, vendar se, za razliko od katepsina L, ki je v telesu povsod izražen, katepsin V v fizioloških pogojih nahaja le v priželjcu, testisih in epiteliju roženice, pri patoloških procesih pa se izraža tudi v drugih tkivih. Katepsin V je udeležen pri napredovanju raka, pri tem se povečano izraža v tumorjih kolorektalnega raka, raka rektuma in dojk, medtem ko v zdravem črevesu in mlečnih žlezah ni prisoten. Poleg tega ima katepsin V pomembno vlogo v imunskih celicah in protitumornem imunskem odzivu, kjer je pomemben pri aktivaciji cistatina F, ki zavira delovanje citotoksičnih celic. Zaradi udeleženosti pri napredovanju raka, regulacija katepsina V s selektivnimi zaviralci odpira možnosti za razvoj novih terapevtskih pristopov in izboljšanje učinkovitosti imunoterapije raka. V okviru magistrske naloge smo zato želeli identificirati potencialne reverzibilne, selektivne in obenem ne toksične zaviralce katepsina V. V ta namen smo testirali spojine, pridobljene iz virtualnih kemijskih knjižnic, ki so bile izbrane na podlagi molekulskega sidranja v aktivno mesto katepsina V. Njihovo sposobnost zaviranja aktivnosti katepsina V in selektivnost za katepsin V v primerjavi s katepsinom L, smo ovrednotili z metodo encimske kinetike in mikrotermoforeze. Pri tem smo ugotovili, da so najmočnejši zaviralci katepsina V spojine 7, 26 in 28. Spojini 7 in 28 sta...
D.10 Pedagoško delo
COBISS.SI-ID: 21019395