Prvi smo pokazali, da je izvor zunajceličnih veziklov poleg do sedaj opisanega zlitja multivezikularnega telesca (MVB) s plazemsko membrano in direktnega uvihanja plazemske membrane navzven, lahko tudi alternativni organel. To je CD9+CD81+ organel podoben MVB, ki pa ni endosomalnega izvora, temveč izhaja iz plazemske membrane. Z virusom HIV-1 okužene mikroglije obilno proizvajajo virusni protein Nef, ki vpliva na pospešeno nastajanje in infektivnost virusa, le malo pa je znanega o njegovi znotrajcelični lokalizaciji, transportu in sproščanju iz celice. Celice dolgoživih humanih mikroglij smo transfecirali s plazmidom z zapisom za Nef označenim z zelenim fluorescentnim proteinom (Nef.GFP), da bi prepoznali z Nef povezane celične strukture, proučili njihovo mobilnost in sproščanje iz celic v kulturi. Analiza western je pokazala, da se Nef.GFP nahaja v znotrajceličnih frakcijah z gostoto podobno organelom pozitivnih za LAMP1. Mikroskopske analize so nato pokazale, da se v Nef.GFP v celicah ni nahajal v endo/lizosomih, označenih z dekstranom ali z barvilom lizoTracker. Konfokalna mikroskopija je razkrila, da so bile Nef.GFP vezikularne strukture v celicah manjše od z dekstranom označenih veziklov in so se, v nasprotju s slednjimi, gibale po celici počasi in neusmerjeno. Povišanje znotrajcelične koncentracije prostega Ca2+ ob stimulaciji z inomicinom je zanemarljivo vplivalo na mobilnost Nef.GFP vezikularnih struktur, vendar je zaviralo sproščanje teh struktur iz celice. Membranskimi tetraspanini CD9 in CD81 so kolokalizirali z Nef.GFP vezikularnimi strukturami.
COBISS.SI-ID: 33745113
Ta članek je pomembna posodobitev smernic, ki so bile za področje raziskav zunajceličnih veziklov (ZV) predlagane leta 2014 (Ključne informacije za študije zunajceličnih veziklov -„MISEV“), na podlagi razvoja področja in novega znanja, ki smo ga pridobili od takrat. V zadnjem desetletju se je močno povečalo število znanstvenih publikacij, ki opisujejo fiziološke in patološke funkcije zunajceličnih veziklov. Izraz ZV zajema različne podvrste struktur celičnega izvora, obdanih s fosfolipidno membrano, imenovanih eksosomi, mikrovezikli, mikro delci, ektosomi, onkosomi, apoptotična telesa in drugo. Zaradi majhnosti in nizkih količin teh delcev v izvornem materialu je pridobitev relativno čistih pripravkov, delo z njimi in opisovanje le-tega pogosto oteženo. Pripisovanje posebnih funkcij na splošno ali le določenim podtipom ZV zahteva poročanje podrobnih informacijah in ne zgolj opis njihove opažene funkcije v potencialno onesnaženem in heterogenem pripravku ZV. Smernice pri delu z ZV in poročanju o njem so zato bistvenega pomena za ponovljivost in primerljivost rezultatov različnih študij ter tako razvoj področja. Smernice MISEV2018 vključujejo tabele in orise predlaganih protokolov in korake za dokumentiranje določenih funkcij povezanih z EV. Na koncu je na voljo kontrolni seznam s povzetki ključnih točk.
COBISS.SI-ID: 34072025
Prvi smo v plazmi polovice s HIV-om okuženih, a zaradi učinkovitega zdravljenja klinično aviremičnih posameznikov, detektirali virusni protein Nef. S tem smo nakazali, da lahko v telesu obstajajo translacijsko aktivni virusni rezervoarji, ki ne proizvajajo virusa, sproščajo pa Nef. Nef je znan patogen dejavnik virusa HIV, ki bi lahko prispeval h kroničnim vnetnim procesom in k z AIDS-om nepovezanim bolezenskim stanjem, ki se pojavljajo pri učinkovito zdravljenih posameznikih. Nef-zunajcelične vezikle bi tako lahko uporabili kot biomarkerje za identifikacijo posameznikov, ki potrebujejo prilagoditev terapije; zaradi toksičnosti pa bi bili Nef-zunajcelični vezikli tudi dobra terapevtska tarča. Za preprosto in natančno določitev prisotnosti virusnega proteina Nef smo optimizirali encimskoimunski test in ga uporabili za kvantifikacijo ravni plazemskega Nef kot pokazatelja aktivnega rezervoarja HIV. V študijo smo vključili 134 vzorcev plazme iz dobro opredeljene študijske kohorte z virusom HIV okuženih in neokuženih preiskovancev iz San Francisca (kohorta SCOPE). Ugotovili smo, da je plazemska raven Nef v korelaciji z ravnijo HIV-RNA v plazmi pri nezdravljenih bolnikih. A Nef smo zaznali tudi v plazmi približno polovice z antiretrovirusno terapijo zdravljenih posameznikov in tistih, ki lahko aviremičnost ohranjajo brez zdravil, kljub nezaznavni ravni HIV-RNA v njihovi plazmi. Raven Nef v plazmi posameznikov, okuženih s HIV, ni bila dosledno v korelaciji ne s številom T-limfocitov CD4+ in CD8+, ne z najnižjim številom T-limfocitov CD4+, niti z razmerjem T-limfocitov CD4+/CD8+.
COBISS.SI-ID: 33608665