Z uporabo bioinformatskih orodij smo ugotovili, da je neprocesirana oblika pernisina , ki vsebuje 430 aminokislinskih ostankov (ako), sestavljenih iz signalnega zaporedja (prvih 24 ako) in proregije od 24 do 92 ako. S pomočjo njegovega homologne termostabilne proteaze Tk-subtilizina smo izdelani 3D model neprocesiranega in zrelega pernizina brez proregije. Naši podatki so pokazali, da je bil pernizin, proizveden iz S. rimosusa, kateremo smo odstarnili proregijo, aktiven medtem ko je imel neprocesiran encim zanemarljivo aktivnost: Neprocesirano obliko smo poskusili termično aktivirati (80 ° C za 30 min), a brez uspeha. Nadaljnja biofizikalna karakterizacija rekombinantnega pernizina iz S. rimosusa je pokazala, da je pernizin ohranil podobne lastnosti kot naravni.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4817272Validacija avtoklava je pokazala nekatere razlike v intenzivnosti in kakovosti metode imunohistokemije na objektnih stekelcih med različnimi vrstam: atipičem praskavcem, klasičnim praskavcem in govejo spongiformno encefalopatijo. Prikazan je vpliv optimalne kombinacije časa in temperature za vsak avtoklav in vsako vrsto vzorca.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4400762Rezultati so pokazali, da je zrela oblika rekombinantnega encima ohranila encimsko aktivnost, medtem ko je bila aktivnost neprocesirane oblike encima, kljub poskusom termične aktivacije, še vedno nizka. Izkazalo se je, da prisotnost proregije ni potrebna za pravilno zvijanje encima, oziroma ne vpliva na njegovo aktivnost. Hkrati so rezultati potrdili, da je bakterija S. rimosus primeren gostitelj za heterologno izražanje pernizina, saj je imela v primerjavi z bakterijo E. coli višje donose pernizina, z optimizacijo sestave produkcijskega gojišča pa se donose lahko še dodatno poveča. Poleg tega je biofizikalna karakterizacija pokazala, da rekombinanten pernizin v večji meri ohrani karakteristike nativnega encima, kar nakazuje na možnost uporabe bakterije S.rimosus kot gostiteljskega organizma za heterologno izražanje različnih termostabilnih proteaz.
B.03 Referat na mednarodni znanstveni konferenci
COBISS.SI-ID: 4829816