Projekti / Programi
HPV okužbe pri slovenskih plodnih in neplodnih moških, njihova škodljivost za semenčice in prenašanje na ženske partnerice: argumenti za zgodnje odkrivanje in preprečevanje
| Koda |
Veda |
Področje |
Podpodročje |
| 3.05.00 |
Medicina |
Reprodukcija človeka |
|
| Koda |
Veda |
Področje |
| B570 |
Biomedicinske vede |
Porodništvo, ginekologija, andrologija, reprodukcija, spolnost |
| Koda |
Veda |
Področje |
| 3.02 |
Medicinske in zdravstvene vede |
Klinična medicina |
neplodni moški, okužba s človeškimi papiloma virusi, kakovost semena, apoptoza, mitohondrijski potencial, fragmentacija DNK, elektronska mikroskopija, histologija mod, prevalenca
Raziskovalci (24)
Organizacije (3)
Povzetek
Človeške papiloma viruse (HPV) etiološko povezujemo s številnimi benignimi in malignimi spremembami celic kožnih in sluzničnih epitelijev pri obeh spolih. Manj je znanega o vplivu HPV na plodnost, zlasti pri moškem. Redke publikacije povezujejo prisotnost HPV DNK v semenu z znižano gibljivostjo semenčic.
Namen naše raziskave je opredeliti vpliv okužbe s HPV na plodnost moških. Določiti želimo povezavo med prisotnostjo HPV DNK v zbranih vzorcih para, zlasti moškega, in kvaliteto njegovega semena. Zanima nas genotipsko specifična prevalenca okužbe s HPV DNK v skupini moških iz neplodnih parov. Ugotavljali bomo kateri organ, modo, nadmodek ali prostata, deluje nenormalno ob prisotnosti HPV DNK. Iskali bomo mehanizem škodljivosti HPV na semenčico. Ženske pri katerih je partner HPV DNK pozitiven, bomo sledili z določanjem HPV DNA in odvzemom citološkega brisa materničnega vratu.
Raziskava bo potekala na Ginekološki kliniki v Ljubljani (GK) v sodelovanju z Inštitutom za mikrobiologijo in imunologijo Medicinske fakultete Univerze v Ljubljani in Centrom za genomiko živali, Veterinarska fakulteta Univerze v Ljubljani.. Vključili bomo 50 neplodnih parov in 50 plodnih parov. Za določitev prevalence HPV DNK bomo vključili še dodatnih 250 moških iz neplodnih parov. Od para bomo pridobili po pet vzorcev; bris materničnega vratu in urin partnerke ter bris površine spolnega uda, urin in seme partnerja. Za določitev prevalence okužbe s HPV pri neplodnih moških bomo zbrali bris površine spolnega uda, urin in seme.
Vse vzorce, razen semena, bomo takoj pripravili in zamrznili do izolacije DNK na -20°C. V Androloškem laboratoriju GK se bo opravila analiza osnovnih lastnosti semena, del semena se bo oddelilo za izolacijo HPV DNK, preostanek pa pripravilo s centrifugiranjem v gostotnem gradientu za določanje označevalcev apoptoze semenčic (mitohondrijski membranski potencial (MMP) in fragmentacija DNK semenčic).
Označevalce apoptoze semenčic bomo določali samo v semenu moških iz plodnih in neplodnih parov. Merjenje označevalcev apoptoze semenčic bo potekalo na pretočnem citometru. MMP se bo določalo z barvanjem semenčic s karbocianatnim barvilom DiOC6(3), fragmentacijo DNK semenčic pa se bo določalo z metodo TUNEL.
Izolacija DNK iz vseh zamrznjenih vzorcev bo izvedena s pomočjo kita QIAampâ DNA Mini Kit (QIAGEN, Gaithersburg, ZDA). Genotipe bomo določali s kitom LINEAR ARRAY HPV Genotyping test (Roche, Branchburg, NJ ZDA).
V vzorcih semena bomo še določili alfa glukozidazo (funkcija nadmodka) in citronsko kislino (funkcije prostate). Iz biopsijskega vzorca tkiva mod azoospermikov bomo izolirali HPV DNK in iskali korelacije s histologijo. Pri moških s HPV bomo opravili elektronsko mikroskopijo semenčic iz ejakulata in moda. Pri ženskah, partnericah moških s HPV bomo vzeli bris materničnega vratu za citološki pregled in izolirali HPV DNK.
Rezultati bodo opredelili povezavo med HPV in plodnostjo: HPV DNK je bolj prisotna v semenu neplodnih moških v primerjavi s plodnimi. Pri moških s HPV DNK v semenu so klasične značilnosti semenčic in/ali označevalci apoptoze semenčic nenormalni. Azoospermiki s HPV DNK imajo več nenormalne spermatogeneze v tkivu moda. Funkciji nadmodka in prostate sta tudi nenormalni. Analiza morfologije semenčic iz ejakulata ali moda z elektronsko mikroskopijo bo pokazala mehanizme vstopa HPV DNK v semenčico. Pri partnericah moških s HPV se HPV DNK in/ali displazija materničnega vratu pojavita v obdobju dveh let od presejanja moškega partnerja.
Asimptomatska okužba s HPV v semenu je povezana z neplodnostjo moškega in pojavom HPV DNK na novo v celicah materničnega vratu, zato je cepljenje moških proti HPV utemeljeno.
Pomen za razvoj znanosti
Na reprezentativnem vzorcu moških iz neplodnih parov vs. kontrolno skupino smo dokazali, da ni korelacije med prisotnostjo HPV DNK v semenu in znižano gibljivostjo, koncentracijo in morfologijo semenčic glede na kriterije SZO. Prav tako nismo našli povezave med prisotnostjo HPV DNK v semenu in patološkimi rezultati funkcionalnih testov semenčic. Z metodo FISH smo določili prisotnost HPV DNK na površini glave semenčice moških iz neplodnih in plodnih parov.
Pomen za razvoj Slovenije
Slovenija je sedaj med sorazmerno redkimi državami v svetu, ki so testirale in določili visoko prevalenco HPV pri neplodnih in plodnih parih. Do sedaj nam je bila znana le prevalenca HPV pri ženskah. Ker si je z dvema objavljenima člankoma naše skupine Slovenija letos pridobila izkušnje v povezavi med HPV okužbo in reprodukcijo, bi lahko vodila dodatne raziskave o vplivu HPV okužbe v postopkih oploditve z biomedicinsko pomočjo.
Najpomembnejši znanstveni rezultati
Letno poročilo
2011,
2012,
2013,
zaključno poročilo,
celotno poročilo na dLib.si
Najpomembnejši družbeno–ekonomsko in kulturno relevantni rezultati
Letno poročilo
2011,
2013,
zaključno poročilo,
celotno poročilo na dLib.si
