Projekti / Programi
Razvoj in uporaba fluorescenčnih biosenzorjev v bioloških sistemih
| Koda |
Veda |
Področje |
Podpodročje |
| 4.06.00 |
Biotehnika |
Biotehnologija |
|
| Koda |
Veda |
Področje |
| T490 |
Tehnološke vede |
Biotehnologija |
| P004 |
Naravoslovno-matematične vede |
Biokemija, presnova |
| T360 |
Tehnološke vede |
Biokemijska tehnologija |
| B230 |
Biomedicinske vede |
Mikrobiologija, bakteriologija, virologija, mikologija |
| P402 |
Naravoslovno-matematične vede |
Fotokemija |
biosenzorji, molekularne osnove bolezni, fiziologija mikroorganizmov, metaboliti, dinamika kalcija, celično signaliziranje, sepsa, imunski odziv
Raziskovalci (6)
Organizacije (1)
| št. |
Evidenčna št. |
Razisk. organizacija |
Kraj |
Matična številka |
Štev. publikacijŠtev. publikacij |
| 1. |
0104 |
Kemijski inštitut |
Ljubljana |
5051592000 |
10 |
Povzetek
Fluorescenčni biosenzorji omogočajo pridobitev neposredne informacije o interakcijah med biološkimi molekulami in o dinamiki prenosa signalov z minimalnimi motnjami v celični integriteti in funkcioniranju v normalnih in patoloških pogojih. Tako bo z uporabo tehnik in vivo spremljanja mogoče bogastvo informacij, ki sta jih ustvarili genomika in proteomika, neposredno prenesti v razumevanje delovanja celice v živo. Cilj projekta je razviti nove fluorescenčne senzorje za spremljanje fizioloških procesov, predvsem signaliziranja v biotehnološko pomembnih filamentoznih glivah, kjer je uporaba teh tehnik še v povojih in v sesalskih celicah, kjer se bomo osredotočili na prepoznavanje endotoksina (LPS) v epitelijskih celicah in monocitih/makrofagih.
Pripravili bomo izboljšane kalcijeve senzorje, za katere je značilno, da je intenziteta FRET-a premosorazmerna s koncentracijo prostih kalcijevih ionov. V omenjenih kalcijevih biosenzorjih bomo spremenili donorsko - akceptorski par vidnih fluorescirajočih proteinov. Spremljali bomo tudi, kako vpliva dodatek spojin s fungicidnim delovanjem na znotrajcelični nivo kalcija v glivah in kakšen vpliv imajo mutacije kalcijeve signalne poti na dinamiko kalcija pri glivah. Namen projekta je tudi pripraviti biosenzorje, ki bodo zagotovili in vivo spremljanje povezav med proteini (agregacija MD-2 in MD-2/TLR4), med proteini in signalnimi molekulami (MD-2/LPS) ter znotrajcelično koncentracijo signalnih molekul (prosti kalcijevi ioni, LPS). Za ta namen bomo uporabili vidne fluorescentne proteine (VFP), FlAsH fluorofore in kemijsko modificirane spojine. Interakcijo med molekulami bomo kvantitativno spremljali s pomočjo FRET efekta. S pomočjo senzorjev bomo ugotavljali mehanizem prepoznavanja sporočanja signala ob vezavi endotoksina na MD-2/TLR4: specifično vprašanje je, koliko je pri tem udeležena di- oz. oligomerizacija MD-2.
Biosenzorji bodo omogočili vzpostaviti sistem za testiranje novih spojin s fungicidnim delovanjem, prognozo razvoja sepse preko nivoja kalcija v monocitih in testiranje spojin, ki preprečujejo aktivacijo celic preko oligomerizacije MD-2/TLR4.
