Projekti / Programi
Priprava človeškega rekombinantnega zaviralca metaloproteinaz TIMP-1 in izdelava specifičnih imunodiagnostičnih reagentov za določanje
| Koda |
Veda |
Področje |
Podpodročje |
| 1.09.00 |
Naravoslovje |
Farmacija |
|
| Koda |
Veda |
Področje |
| B740 |
Biomedicinske vede |
Farmakološke vede, farmakognozija, farmacija, toksikologija |
| T490 |
Tehnološke vede |
Biotehnologija |
rekombinantni proteini, tkivni zaviralec metaloproteinaz-1 (TIMP-1); Pichia pastoris; Escherichia coli; prikaz na fagu; enoverižni fragmenti Fv; fuzijski proteini; alkalna fosfataza; test ELISA; melanom; revmatoidni artritis
Raziskovalci (8)
Organizacije (2)
Povzetek
V fizioloških pogojih najdemo visoke koncentracije nevezanih zaviralcev metaloproteinaz predvsem v takoimenovanih imunsko priviligiranih tkivih, v katerih praviloma ni krvnih žil. Mednje sodita sklepni hrustanec in roženica. Za razrast krvnega žilja je namreč potrebno neovirano delovanje tkivnih metaloproteinaz. Spremenjene vzorce izločanja posameznih sestavin sistema tkivnih metaloproteinaz in njihovih zaviralcev so opazili pri bolnikih z multiplo sklerozo, s kroničnimi boleznimi jeter, s kožno sklerozo ter s številnimi rakavimi obolenji, npr. metastatskim melanomom, gliomom, lipomom, adenokarcinomom jajčnikov in rakom debelega črevesja. Pri raku spremlja preklop na izrazito maligni fenotip največkrat pospešeno izločanje metaloproteinaz, posledica česar je razraščanje žil in metastaziranje tumorjev. Na takšno neravnovesje se organizem odzove s povečano proizvodnjo metaloproteinaznih zaviralcev, med katerimi je tudi TIMP-1.V bakterijskem (E. coli) in glivnem (Pichia pastoris) ekspresijskem sistemu bomo izdelali prečiščeni človeški rekombinantni TIMP-1, katerega aktivnost bomo ugotavljali v različnih modelih in vitro ter s tem preverjali možnosti za njegovo potencialno terapevtsko uporabnost. Poleg tega pa nam bo služil tudi kot osnova za pripravo popolnoma rekombinantnih imunodiagnostičnih reagentov, ki jih bomo uporabili v testu ELISA za določanje koncentracij TIMP-1 v bioloških vzorcih. Na ta način bomo izmerili količine omenjenega proteina v serumskih vzorcih zdravih oseb ter jih primerjali s tistimi, ki jih bomo določili v serumih bolnikov z melanomom ali revmatoidnim artritisom. Pričakujemo, da bomo z rezultati dokazali prognostični pomen količine TIMP-1 pri poteku bolezni, poleg tega pa nedvoumno prikazali široko uporabnost tehnologije rekombinantnih fragmentov protiteles za pripravo različnih diagnostičnih testov in vitro.
